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液相色譜柱按色譜固定相基質(zhì)的分類
液相色譜柱的空柱由柱接頭,、柱管及濾片組裝而成。柱接頭采用低死體積結(jié)構(gòu),，柱接頭是兩端螺紋組件,，一端是為7/16英寸內(nèi)螺紋，另一端是3/16英寸的內(nèi)螺紋(國內(nèi)外已規(guī)范化),。7/16英寸內(nèi)螺紋與1/4英寸柱管(Φ6.35mm)連接,，中間放置壓環(huán)用于密封。3/16英寸的內(nèi)螺紋與1/16英寸(Φ1.57mm)的連接管連接，中間也放置壓環(huán)用于柱接頭的密封,。為了盡量減少柱外死體積,，在安裝色譜柱時，用Φ1.57mm連接管通過空心螺釘壓環(huán)后要盡量插到底,，然后再擰緊空心螺釘,。壓環(huán)被空心螺釘擠壓變形后緊箍在連接管上(連接管通過壓環(huán)后露出的管長度應(yīng)嚴格控制在2.5mm長或其他固定尺寸)。
液相色譜柱在兩端柱接頭內(nèi),，柱管兩端各放置一片不銹鋼濾片(或濾網(wǎng)),，用于封堵柱填料不被流動相沖出柱外而流失,?？罩鹘M件均為316L不銹鋼材質(zhì)，能耐受一般的溶劑作用,。但由于含氯化物的溶劑對其有一定的腐蝕性,，故使用時要注意，柱及連接管內(nèi)不能長時間存留此類溶劑,，以避免腐蝕,。
液相色譜柱按色譜固定相基質(zhì)的分類：
一.硅膠基質(zhì)：
1.反相色譜柱：
反相色譜填料常是以硅膠為基礎(chǔ)，表面鍵合有極性相對較弱的官能團的鍵合相,。
反相色譜所使用的流動相極性較強,，通常為水，緩沖液與甲醇,，已腈等混合物,。
樣品流出色譜柱的順序是極性較強組合zui先被沖出，而極性弱的組份會在色譜柱上有更強的保留,。
常用的反相填料有C18（ODS）,、C8（MOS）、C4（B）,、C6H5（Phenyl）等,。
2.正相色譜：
正相色譜用的固定相通常為硅膠（Silica），以及其他具有極性官能團,，如胺基團（NH2,APS）和氰基團（CN,，CPS）的鍵合相填料。
由于硅膠表面的硅羥基（SiOH）或其他團的極性較強,，因此,，分離的次序是依據(jù)樣品中的各組份的極性大小，即極性強弱的組份zui先被沖洗出色譜柱,。
正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低,，如：正乙烷（Hexane）,氯仿（Chloroform）,二氯甲烷（Methylene Chloride）等。
3.離子交換色譜柱：以磺化交聯(lián)強陰/陽離子鍵合硅膠色譜柱，常用規(guī)格：強陰離子色譜柱（SAX）,，強陽離子交換色譜柱（SCX）
二 .聚合物基質(zhì)：
聚合物調(diào)料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等,，其主要優(yōu)點是在PH值為1～14均可使用。相對與硅膠基質(zhì)的C18填料,，這類填料具有更強的疏水性,；大孔的聚合物填料對蛋白質(zhì)等樣品的分離非常有效。現(xiàn)在的聚合物填料的缺點是相對硅膠基質(zhì)填料,，色譜柱柱效較低,。
三.其他無機填料：
其它HPLC的無機填料色譜柱也已經(jīng)商品化。由于其特殊的性質(zhì),，一般于特殊的用途,。如石墨化碳也用于正逐漸成為反相色譜填料。這種填料的分離不同與硅膠基質(zhì)烷基鍵合相,，石墨化碳的表面即是保留的基礎(chǔ),，不再需其它的表面改性，該柱填料一般比烷基鍵合硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強,，石墨化碳可用于分離某些幾何導(dǎo)構(gòu)體,，又由于HPLC流動相中不會被溶解，這類柱可在任何PH與溫度下使用,。氧化鋁也可用于HPLC,，
氧化鋁微粒剛性強，可制成穩(wěn)定的色譜柱柱床,，其優(yōu)點是可在PH高達12的流動相中使用,。
但由于氧化鋁與堿性化合物作用也很強，應(yīng)用范圍受到一定的限制,，所以未能廣泛應(yīng)用,，新型氧化鋯填料也可用于HPLC，商品化的僅有聚合物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱,，應(yīng)用PH范圍1～14,，溫度可達100℃。由于氧化鋯填料幾年才開始研究,，加之面臨的實驗難度,，其重要用途與優(yōu)勢尚在進行中。