牛細小病毒（BPV）核酸檢測試劑盒（熒光 PCR 法）

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：牛細小病毒（BPV）核酸檢測試劑盒（熒光 PCR 法）

Name：Bovine Parvovirus Detection Kit (Real-Time PCR Method)

【包裝規(guī)格】50T/盒

【預期用途】牛細小病毒病是由牛細小病毒感染引起的一種接觸性傳染病。該病主要臨床特征是母牛生殖機能障礙和犢牛呼吸道,、消化道疾病,。該病毒主要經(jīng)口和空氣等途徑傳遞。

本試劑盒適用于檢測腹瀉糞便,、腸系膜淋巴結(jié),、肝臟、腎,、肺,、肝、腦,、睪丸,、胎盤和淋巴結(jié)、全血等樣本中的牛細小病毒,，用于牛細小病毒感染的輔助診斷,。

【檢驗原理】

本試劑盒采用 TaqMan 探針法實時熒光 PCR 技術(shù)，設計一對牛細小病毒基因組特異性引物,，結(jié)合一條特異性探針,，用熒光 PCR 技術(shù)對牛細小病毒基因組的 DNA 進行體外擴增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷,。

【試劑組成】

不同批號的試劑盒組分不可交互使用,。

【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃,，避光保存、運輸,、反復凍融次數(shù)不超過 5 次,，有效期 12 個月。

【適用儀器】

ABI ,、安捷倫 MX3000P/3005P,、LightCycler、Bio-Rad,、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀,。

【標本采集】

捕殺牛：取肺部病變組織，5g,；活牛：用滅菌棉拭子沾取牛氣管或眼鼻分泌物,，然后置于裝有 0.5mL 生理鹽水的離心管中。

【保存和運輸】

上述標本短期內(nèi)可保存于-20℃,，長期保存可置-70℃，但不能超過 6 個月,，標本運送應采用 2~8℃冰袋運輸,， 嚴禁反復凍融。

1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）

取動物組織及其制品,、食品或飼料約 1g,，手術(shù)剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨,，待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中,， 8000rpm 離心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中,。核酸提取

1.3 核酸提取采用核酸提取或純化試劑（磁珠法或離心柱法）,，請嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

2. 試劑配制（試劑準備區(qū)）

根據(jù)待檢測樣本總數(shù),，設所需要的 PCR 反應管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照,；樣品每滿 10份，多配制 1 份),，每測試反應體系配制如下表：

1. 結(jié)果分析判定

1.1 結(jié)果分析條件設定

設置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結(jié)果分析,，當曲線出現(xiàn)整體傾斜時，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),，以及 Threshold 的Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照)，重新分析結(jié)果,。

1.2 結(jié)果判斷

陽性：檢測通道 Ct 值≤35,，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線,；

可疑：檢測通道 35<Ct 值≤38，建議重復檢測,，如果檢測通道仍為 35<Ct 值≤38,，且曲線有明顯的增長曲線， 判定為陽性,，否則為陰性,；

陰性：樣本檢測結(jié)果 Ct 值>38 或無 Ct 值。

2. 質(zhì)控標準

陰性質(zhì)控品：Ct>38 或無 Ct 值顯示,；

陽性質(zhì)控品：擴增曲線有明顯指數(shù)生長期,，且 Ct 值≤32； 以上條件應同時滿足,，否則實驗視為無效,。

牛腺病毒3型(BAV-3)試劑盒(熒光-PCR法)【注意事項】

? 所有操作嚴格按照說明書進行；檢驗過程中,，參照《GB/T 27403 實驗室質(zhì)量控制規(guī)范 食品分子生物學檢測》的規(guī)定進行,。

? 試劑盒內(nèi)各種組分使用前應自然融化，混勻并短暫離心,；

? 反應液應避光保存,；

? 反應中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊,；

? 使用一次性吸頭,、一次性手套和各區(qū)工作服；

? 樣本處理,、試劑配制,、加樣需在不同區(qū)進行，以免交叉污染,；

? 實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器,；

? 試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全   通則》進行處理,。

滬崢PCR優(yōu)勢：

   1.   特異性：所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析,，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保
所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,，可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測,。

   2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證。

   3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,，可實現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程,。

   4.   實用性：檢測范圍廣,，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌,，可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時,。