牛腺病毒3型(BAV-3)試劑盒(熒光-PCR法)

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：牛腺病毒 3 型（BAV-3）核酸檢測試劑盒（熒光 PCR 法）

Name：Bovine Adenovirus Detection Kit（Real-Time PCR Method）

【包裝規(guī)格】50T/盒

【預(yù)期用途】

牛腺病毒 3 型（BAV-3）是引起牛呼吸道疾病的主要病原體之一,，特別是新生犢牛。臨床癥狀包括發(fā)燒,，呼吸困難,，鼻腔和眼結(jié)膜有分泌物等。病理變化主要出現(xiàn)在肺部,，具有鮮明的肺小葉,、肺氣腫和突變。血清學(xué)調(diào)查表明該病廣泛分布于世界各地,，給養(yǎng)牛業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失,。

本試劑盒適用于檢測肺組織、呼吸道及眼鼻分泌物等樣本中的牛腺病毒 3 型,，用于牛腺病毒 3 型感染的輔助診斷,。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒采用 TaqMan 探針法實(shí)時(shí)熒光 PCR 技術(shù)，設(shè)計(jì)一對(duì)牛腺病毒 3 型基因保守區(qū)特異性引物,，結(jié)合一條特異性探針,，用熒光 PCR 技術(shù)對(duì)牛腺病毒 3 型基因保守區(qū)的 DNA 進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測，用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷,。

【試劑組成】

【儲(chǔ)存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存,、運(yùn)輸,、反復(fù)凍融次數(shù)不超過 5 次，有效期 12 個(gè)月,。

【適用儀器】

ABI ,、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler,、Bio-Rad,、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

【標(biāo)本采集】

捕殺牛：取肺部病變組織,，5g,；活牛：用滅菌棉拭子沾取牛氣管或眼鼻分泌物，然后置于裝有 0.5mL 生理鹽水的離心管中,。

【保存和運(yùn)輸】

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,，長期保存可置-70℃，但不能超過 6 個(gè)月,，標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸,， 嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）

取動(dòng)物組織及其制品、食品或飼料約 1g,，手術(shù)剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨,，加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨,，待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中,， 8000rpm 離心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中,。核酸提取

1.3 核酸提取采用核酸提取或純化試劑（磁珠法或離心柱法）,，請(qǐng)嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

2. 試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

根據(jù)待檢測樣本總數(shù),，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對(duì)照+1 管陽性對(duì)照,；樣品每滿 10份，多配制 1 份),，每測試反應(yīng)體系配制如下表：

1. 結(jié)果分析判定

1.1 結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析,，當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時(shí)，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),，以及 Threshold 的Value 值(上下拖動(dòng)閾值線至高于陰性對(duì)照)，重新分析結(jié)果,。

1.2 結(jié)果判斷

陽性：檢測通道 Ct 值≤35,，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線；

可疑：檢測通道 35<Ct 值≤38,，建議重復(fù)檢測,，如果檢測通道仍為 35<Ct 值≤38，且曲線有明顯的增長曲線,， 判定為陽性,，否則為陰性；

陰性：樣本檢測結(jié)果 Ct 值>38 或無 Ct 值,。

2. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品：Ct>38 或無 Ct 值顯示,；

陽性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長期，且 Ct 值≤32,； 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足,，否則實(shí)驗(yàn)視為無效。

牛腺病毒3型(BAV-3)試劑盒(熒光-PCR法)【注意事項(xiàng)】

? 所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行,；檢驗(yàn)過程中,，參照《GB/T 27403 實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品分子生物學(xué)檢測》的規(guī)定進(jìn)行。

? 試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,，混勻并短暫離心,；

? 反應(yīng)液應(yīng)避光保存,；

? 反應(yīng)中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊,；

? 使用一次性吸頭,、一次性手套和各區(qū)工作服；

? 樣本處理,、試劑配制,、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行，以免交叉污染,；

? 實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器,；

? 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全   通則》進(jìn)行處理,。

滬崢PCR優(yōu)勢：

   1.   特異性：所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,，經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對(duì)，確保
所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測,。

   2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證。

   3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測菌的高靈敏檢測,，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程,。

   4.   實(shí)用性：檢測范圍廣,，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,，整個(gè)檢測過程為3-4個(gè)小時(shí),。