細胞污染鑒定
一,、肉眼觀察以下幾項:
1. 細胞瓶身:
如果瓶身上沒有裂縫,,正常,;如果瓶身上有裂縫,則污染幾率非常大,。
2. 培養(yǎng)基顏色:
如果培養(yǎng)基顏色是紅色或者粉色,,正常,;如果是橙色,則可能是污染或者細胞過密,;如果是黃色,,則污染幾率非常大。
3. 培養(yǎng)基澄清度:
如果培養(yǎng)基澄清,,正常,;如果有少許漂浮物,則可能是污染或者有細胞凋亡,;如果培養(yǎng)基很渾濁,,甚至出現(xiàn)絮狀物,,則污染幾率非常大,。
二、進行顯微鏡下觀察(通常觀察前需先靜置細胞1-2h)
顯微鏡下可以清晰觀察到細胞是否有菌類污染,,菌類污染通常分為桿菌,、球菌和霉菌,為了方便大家分辨,,我特地找了之前收到有典型污染的細胞照片,,希望能幫助大家判斷。
1. 桿菌
常見的有大腸桿菌,,長度通常在2-5um左右,。
2. 球菌
常見的有葡萄球菌,直徑通常在1-2um左右,。
3. 霉菌
常見的有毛霉,,菌絲寬2-10um左右,長度短則幾十um,,長則可達幾mm,。
需要提醒的是,因為運輸過程中細胞離開了其正常生長所需要的環(huán)境,,部分細胞會出現(xiàn)凋亡或產(chǎn)生細胞碎片,,容易誤認為是細菌污染;另外培養(yǎng)基中的雜質(zhì)纖維也容易誤認為是霉菌污染,,具體區(qū)分方法如下:
1.細胞碎片和桿菌
細胞碎片只會隨著細胞狀態(tài)的變差而變多,,通常增長不快;桿菌則增殖非???,以常見的大腸桿菌為例,常溫25℃增殖1倍需要40min左右(此數(shù)據(jù)可查閱相關文獻驗證),,培養(yǎng)基很快變黃且渾濁,。
2.凋亡細胞和球菌
凋亡細胞通常只比正常細胞小一點,,只會隨著細胞狀態(tài)的變差而變多,通常增長不快,;球菌則要小很多,,且成串或成團,培養(yǎng)基很快變黃且渾濁,。
3.雜質(zhì)纖維和霉菌
雜質(zhì)纖維通常是過濾時殘留的濾紙纖維,,或者是酒精棉球上的棉纖維,在不開瓶處理的情況下其數(shù)量不會增長,;霉菌的話雖然增殖速度沒有桿菌和球菌快,,但還是會有明顯增殖。