脂肪氧化酶活性測定
一、蛋白質(zhì) 鹽析分離的原理:
蛋白質(zhì)在稀鹽溶液中溶解度會隨著鹽濃度的增大而上升(鹽溶),當鹽濃度增大到一定數(shù)值時,其溶解度又逐漸下降直至蛋白質(zhì)析出,。鹽析的發(fā)生是由于鹽濃度增大到一定數(shù)值時使水活性降低,導致蛋白質(zhì)分子 表面電荷逐漸被中和,水化膜逐漸被破壞,,引起蛋白質(zhì)分子之間相互聚集并從溶液中析出,后經(jīng)離心機 分離后獲得沉淀物和上清液,。
二,、影響蛋白 質(zhì)鹽析分離的因素:
1、蛋白質(zhì)濃度 :
蛋白質(zhì)濃度過大,,鹽析時發(fā)生共沉現(xiàn)象,,分離效果不好。蛋白質(zhì)濃度太稀,,耗鹽量過大,,蛋白質(zhì)回收率低。一般蛋白質(zhì)濃度在2.5%~3.0%較適中,。
2,、離子強度:
離子強度越大,蛋白質(zhì)的溶解度越低,,越容易產(chǎn)生鹽析現(xiàn)象,。
3、離子類型:
離子半徑小而價數(shù)高的離子,,對鹽析影響較強,。離子半徑大而價數(shù)低的離子,對鹽析影響較弱,。
4,、PH值:
蛋白質(zhì)所帶凈電荷越多,溶解度越大,。凈電荷為零時,,溶解度低。一般將PH值調(diào)到蛋白質(zhì)等電點附近,,這樣有利于鹽析,。
5、溫度:
低離子強度或水中,,在一定范圍內(nèi)蛋白質(zhì)的溶解度隨著溫度的升高而增大,。高鹽溶液中,蛋白質(zhì)的溶解度隨著溫度的升高有時反而下降,。一般情況下在0~4℃操作