產品及特點 | 本產品是天澤基因植物RNAOUT（CAT#：3080）的柱式升級產品,，它結合了植物RNAOUT的性(其效果在近五十多種各類植物中得到驗證,，植物名單見植物RNAOUT產品介紹的附錄)和天澤基因柱式純化系列產品的快捷性。該產品特點如下： - 操作更加簡單快速,，處理一個樣品只需要約十分鐘,，比植物RNAOUT快一倍。
- RNA純度更高,，平均 OD260/280一般都在2.0左右,，能夠有效去除大多數(shù)植物中的多糖污染。
- 小RNA回收效率更高,。
- 適用于所有用植物RNAOUT能提出RNA的植物(注:對有些植物可能需要在溶液A中額外添加RVC),。
- 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern雜交,、cDNA合成等實驗,。
- 性價比高于進口的柱式植物RNA提取產品。
- 一站式,，提供RNase-free的樣品收集管,。
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使用方法 | - 估算組織細胞的用量。每次微量提取一般需要100-200 mg植物葉片,、或50-100 mg植物種子,、或200-500 mg植物果實。
- 樣品破碎：
- 勻漿法：先將新鮮植物組織剪切成小塊(保存在RNALOCKER中的植物組織需用紙吸去RNALOCKER液體后再剪切成小塊),，放入10-15 mL塑料離心管中,，加入1 mL溶液A，然后用勻漿器勻漿5-20秒,。勻漿時會產生泡沫,，但不影響提取效果。
- 液氮研磨法（適用于復雜,，易降解樣品）：取適量新鮮植物組織放入含液氮的研缽中,，迅速將組織研磨成粉末后，將粉末轉移到合適的塑料離心管中,，加入1 mL溶液A,，立即劇烈振蕩20秒，充分混勻,。
注意：溶解溶液A沉淀,。溶液A在4℃放置后可能會產生沉淀，使用前必須放在65℃水浴使沉淀*溶解并充分搖勻后再取用,。 - 將勻漿物或液氮研磨物轉移至干凈的1.5 mL塑料離心管中(可以不必轉移非液體的細胞碎片),。有的植物組織（比如果實）含有大量水份，勻漿液會多于1 mL,，轉移時也只取1 mL,。
- 在離心管中加入0.3 mL的溶液B和0.2 mL自備氯，在振蕩器上振蕩30秒混勻,，此時溶液呈均勻的乳濁狀,。振蕩器振蕩時必須使管底溶液震蕩起來。
- 室溫12000-15000 g離心3-5分鐘,，兩相間將有約5-10毫米厚的細胞破碎物,。
- 將上清液(約0.6 mL)轉移到另一干凈的1.5 mL塑料離心管中，下層有機相和中間層含有DNA、蛋白質和其他雜質,，避免觸及或吸取,。留下100 uL上清液不取。
- 加入等體積的溶液C,，充分顛倒混勻,。如果有沉淀產生（對某些植物，屬于正?，F(xiàn)象）,，千萬不要去掉沉淀，一定要把所有的混合物上柱,。
- 將一半的溶液（如果有沉淀,，則先混勻）轉移到離心吸附柱中，13000-15000 g室溫離心半分鐘,，棄穿透液,。
- 將剩下的一半溶液（如果有沉淀，則先混勻）轉移到同一離心吸附柱中,， 13000-15000 g室溫離心半分鐘,，棄穿透液。
- 加0.7 mL通用洗柱液,，室溫離心半分鐘,，棄穿透液。再加0.3 mL通用洗柱液,，室溫離心半分鐘,，棄穿透液,。一般樣品如此洗滌兩次即可,，但如果在第7步加入溶液C后有沉淀產生，則需要洗三次,，每次加入的通用洗滌液的量分別為0.4,、0.3和0.3 mL。
- 室溫離心半分鐘,。此步十分重要,，否則殘留的乙醇會影響RNA的使用。
- 將離心吸附柱轉移到RNase-free收集管中,，加入50-100 uL RNA洗脫液,，室溫放置1-2分鐘。
- 13000-15000 g室溫離心半分鐘,，離心管中溶液即為RNA樣品,，可以立即使用或存放于-80℃待用。
- RNA完整性的電泳檢測：如果需要做Northern雜交，強烈建議用戶使用甲醛變性膠進行RNA電泳,，因為非變性膠不能分離所有的RNA分子（BioTechniques,，28：414，2000）,。
- RNA產量產率測定：將5-10 μL RNA溶于TE緩沖液中(pH7.5-8.2之間)檢測其在OD260的光吸收,。通過光吸收可以得出RNA濃度（1 OD260的RNA=40 μg/mL），進而計算出RNA的產量（濃度X體積)和產率(RNA產量/組織用量),。
- RNA純度測定：無污染的總RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關),，高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質污染，但一般不影響RT-PCR等反應,。
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