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雙特異性抗體（簡稱“雙抗”）是一種新型的抗體藥物,，它可以同時發(fā)揮兩種單抗聯(lián)用的協(xié)同作用,，臨床價值很高，但其質(zhì)量控制的要求也非常嚴格,。在雙抗研發(fā)生產(chǎn)過程中,，需要對雙抗分子的大小異質(zhì)性進行測定，以確認雙抗的連接情況,，保障產(chǎn)品質(zhì)量,。

然而雙抗分子量的測定條件中不僅需要使用高濃度的鹽進行洗脫,，而且紫外檢測器無法直接得到分子量，這對常規(guī)液相系統(tǒng)管路的耐腐蝕性及檢測器提出了挑戰(zhàn),。

本文采用島津生物惰性液相色譜儀Nexera XS inert搭配多角度光散射檢測器（MALS）測定雙抗分子量,，為推斷雙抗連接情況提供分析依據(jù)。

分析條件

流動相A：50mM磷酸鹽緩沖液+300mM NaCl（pH=6.8）

流動相B：乙腈

檢測器1：二極管陣列檢測器SPD-M40A

檢測器2：多角度光散射檢測器MALS

樣品制備條件及其他分析條件略

結(jié)果

MALS需要通過測定已知分子量的標準溶液得到儀器響應常數(shù),，圖1是牛血清蛋白標準溶液(66500Da)色譜圖,，計算得到MALS響應強度為2.9626×10-7，SPD-M40A響應強度為8.8552×105,。

圖 2為雙抗樣品色譜圖,，該樣品為單抗Fc端融合型雙抗，雙抗樣品檢出3個主要色譜峰,，計算得到峰1,、峰2、峰3重均分子量Mw分別為197708Da,、145121Da,、56401Da，三峰重均分子量與數(shù)均分子量的比值（Mw/Mn）均為1.00,，峰2與峰3分子量之和201522Da,，與峰1分子量偏差為1.92%，因此推測出：

峰1為雙抗（單抗Fc端融合scFv）

峰2為單抗（未融合scFv）

峰3為單鏈抗體scFv,。

雙抗分子量測定信息見表1,。

圖1 牛血清蛋白標準溶液色譜圖

圖2 雙抗樣品色譜圖

表1 雙抗樣品分子量分布

結(jié)論

本文通過體積排阻色譜法（SEC）聯(lián)合多角度光散射檢測器（MALS）對單抗Fc端融合型對稱分子樣品大小異質(zhì)性進行分析，SEC根據(jù)分子量大小分離雙抗樣品,，MALS檢測器測定雙抗樣品分子量,，從而推斷雙抗樣品連接情況。此方法簡單高效,、準確度高,，可用于測定雙抗樣品分子量。

Nexera XS inert生物惰性系統(tǒng)將 UHPLC 系統(tǒng)的高壓耐受性與完全惰性的樣品流路完美結(jié)合,，確保沒有金屬表面的吸附作用,，且具有高耐腐蝕性，從而為生物分子的分離提供了理想的解決方案,。

?  更大限度降低因金屬吸附而造成的損失

?  輕松應對高鹽濃度和極端pH流動相的挑戰(zhàn)

?  獲得卓越的靈敏度,、重現(xiàn)性和分離度

本文內(nèi)容非商業(yè)廣告，僅供專業(yè)人士參考,。