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國標解讀丨動物毛發(fā)MALDI-TOF定性定量檢測方法
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GB/T 42699.2-2023《紡織品 某些動物毛纖維蛋白質組定性和定量分析 第2部分:還原蛋白質多肽分析基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜(MALDI-TOF-MS)法》,,在2023-08-06正式發(fā)布,,將在2024-03-01正式實施。該國家標準由 TC209(全國紡織品標準化技術委員會)歸口,,TC209SC1(全國紡織品標準化技術委員會基礎標準分會)執(zhí)行 ,,主管部門為中國紡織工業(yè)聯合會,。
標準概要
n 該標準修改采用ISO國際標準:ISO 20418-2:2018,。國際標準是基于島津MALDI-TOF系統(tǒng)上開發(fā),,并在日本發(fā)行。
n 國內標準與國際標準的差異其中之一是將國際標準采用的帶反射模式(島津AXIMA Performance),更改為反射模式或線性模式,。適用MALDI-TOF機型擴展為線性模式的臺式機MALDI-TOF同時適用標準,。
n 該標準目的是確立采用MALDI-TOF法測定紡織品中動物毛纖維混合物組分的定性定量方法。
動物毛纖維蛋白質組定性和定量分析MALDI-TOF法原理
使用十二烷基磺酸鈉(SDS)/二硫蘇糖醇(DTT)/磷酸鹽緩沖液,,提取動物毛發(fā)中的蛋白質,。提取的蛋白質經聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)純化,再經胰蛋白酶對凝膠中的蛋白質進行酶解,。使用MALDI-TOF-MS對物種特異的蛋白質比例進行分析,。對照標準曲線計算出混合物中各動物毛纖維的含量。
物種特異峰值出現的分子量范圍為2450 m/z~2750 m/z,,各種動物毛纖維特種峰值在標準中已列出:
動物毛發(fā)鑒別分析技術在各個領域都起著重要作用,。獸毛被用于制作外套、上衣,、毛衣等各種纖維制品。制作這樣的纖維制品時,,有義務根據家庭用品品質標識法對纖維的種類,、使用多種纖維時的混用率進行標識。另外,,毛發(fā)混入食品中時,,確定毛發(fā)種類對明確混入途徑至關重要。
經過胰蛋白酶處理的多肽采用MALDI-TOF MS分析,。用MALDI-TOF MS檢測金屬靶板上的結晶樣品,。調整激光功率等的檢測條件,確保在觀察動物種類特異性峰值的m/z2450-2750領域能得到良好的分辨率,。通過對SDS-PAGE蛋白條帶進行胰蛋白酶解后的樣品,,進行MALDI-TOF MS檢測。
通過MALDI-TOF MS技術找到山羊絨,、羊毛,、牦牛毛三者之間的差異峰值區(qū)間m/z 2450-2750和特異峰值。如圖所示,。
MALDI-TOF MS 中的動物物種類特異性峰值
島津應對方案和機型
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