液相色譜的原理
由以上方法可知,，在色譜法中存在兩相,，一相是固定不動(dòng)的，我們把它叫做固定相；另一相則不斷流過固定相,，我們把它叫做流動(dòng)相,。
色譜法的分離原理就是利用待分離的各種物質(zhì)在兩相中的分配系數(shù)、吸附能力等親和能力的不同來進(jìn)行分離的,。
使用外力使含有樣品的流動(dòng)相（氣體,、液體）通過一固定于柱中或平板上、與流動(dòng)相互不相溶的固定相表面,。當(dāng)流動(dòng)相中攜帶的混合物流經(jīng)固定相時(shí),，混合物中的各組分與固定相發(fā)生相互作用。
由于混合物中各組分在性質(zhì)和結(jié)構(gòu)上的差異,，與固定相之間產(chǎn)生的作用力的大小,、強(qiáng)弱不同，隨著流動(dòng)相的移動(dòng),，混合物在兩相間經(jīng)過反復(fù)多次的分配平衡,，使得各組分被固定相保留的時(shí)間不同，從而按一定次序由固定相中先后流出,。與適當(dāng)?shù)闹髾z測(cè)方法結(jié)合,，實(shí)現(xiàn)混合物中各組分的分離與檢測(cè)。
液相色譜的分類
色譜分析法有很多種類,，從不同的角度出發(fā)可以有不同的分類方法,。
從兩相的狀態(tài)分類：
色譜法中，流動(dòng)相可以是氣體,，也可以是液體,，由此可分為氣相色譜法（GC）和液相色譜法（LC）。固定相既可以是固體,，也可以是涂在固體上的液體,，由此又可將氣相色譜法和液相色譜法分為氣-液色譜、氣-固色譜,、液-固色譜,、液-液色譜。
另外,，還有一種超臨界流體色譜法（supercritical fluid chromatography SFC）,，超臨界流體色譜是指用超臨界流體做流通相，以固體吸附劑（如硅膠）或鍵合到載體（或毛細(xì)管壁）上的高聚物為固定相的色譜法,。超臨界流體是在高于臨界壓力和臨界溫度時(shí)的一種物質(zhì)狀態(tài),，它既不是氣體也不是液體，但兼有氣體和液體的某些性質(zhì)（藥物色譜分析 主編丁黎 人民衛(wèi)生出版社2008年7月*版）,。
液相色譜法（HPLC）是繼氣相色譜之后,，70年代初期發(fā)展起來的一種以液體做流動(dòng)相的新色譜技術(shù),。
液相色譜是在氣相色譜和經(jīng)典色譜的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的。現(xiàn)代液相色譜和經(jīng)典液相色譜沒有本質(zhì)的區(qū)別,。不同點(diǎn)僅僅是現(xiàn)代液相色譜比經(jīng)典液相色譜有較高的效率和實(shí)現(xiàn)了自動(dòng)化 操作,。經(jīng)典的液相色譜法，流動(dòng)相在常壓下輸送,，所用的固定相柱效低,，分析周期長(zhǎng)。而現(xiàn)代液相色譜法引用了氣相色譜的理論,，流動(dòng)相改為高壓輸送（zui高輸送壓力可達(dá)4.9?107Pa）;色譜柱是以特殊的方法用小粒徑的填料填充而成,，從而使柱效大大高于經(jīng)典液相色譜（每米塔板數(shù)可達(dá)幾萬或幾十萬）；同時(shí)柱后連有高靈敏度的檢測(cè)器,，可對(duì)流出物進(jìn)行連續(xù)檢測(cè),。因此，液相色譜具有分析速度快,、分離效能高,、自動(dòng)化等特點(diǎn)。所以人們稱它為高壓,、高速,、或現(xiàn)代液相色譜法。
HPLC 系統(tǒng)一般由液相色譜儀主要由進(jìn)樣系統(tǒng),、輸液系統(tǒng),、分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等組成,。
其中高壓輸液泵,、色譜柱、檢測(cè)器是關(guān)鍵部件,。有的儀器還有梯度洗脫裝置,、在線脫氣機(jī)、自動(dòng)進(jìn)樣器,、預(yù)柱或保護(hù)柱,、柱溫控制器等,，現(xiàn)代 HPLC 儀還有微機(jī)控制系統(tǒng),，進(jìn)行自動(dòng)化儀器控制和數(shù)據(jù)處理。制備型 HPLC 儀還備有自動(dòng)餾分收集裝置,。
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