DNA合成儀的使用方法操作步驟
以亞磷酰胺寡核苷酸合成為例介紹該類儀器的一般操作步驟,。亞磷酰胺DNA合成的試劑有:保護堿基的5/—DMT,,A、G,、C,、T亞磷酰胺單體,四唑偶聯(lián)催化劑,,乙酐,,N—甲基咪唑封閉試劑,三氯乙酸(TCA)脫保護溶液,,12氧化混合物,,乙腈清洗溶劑,氨水切除溶液,。使用步驟如下:
1)仔細檢查合成儀上所有試劑瓶中的試劑量,,必要時換掉試劑瓶,,特別注意乙腈的量,因為該溶劑用量較大,。
2)將標記好的清潔的收集瓶裝在合成儀上。
3)將要合成的DNA序列輸入合成儀,。
4)檢查選擇的合成步驟是否正確,。
5)選擇結(jié)束方法:TritylOffAuto是儀器的原始狀態(tài),若打算以5,,—DMT基團連接純化寡核苷酸,,將其轉(zhuǎn)變?yōu)門ritylOnAuto結(jié)束狀態(tài)。
6)選擇結(jié)束方法,,一般為系統(tǒng)的原始狀態(tài),。
7)在每個柱監(jiān)視器的Username下,輸入你所希望的保存名字,。
8)以代碼代替相應的DNA序列標記每一個收集瓶,。
9)打印出每一個柱設置的詳細資料。
10)檢查打印出來的資料是否正確,。
11)運行StartColumn步驟檢查每一個柱的位置,,確保合成儀上合成柱處于正確的位置。
12)檢查連接在合成儀上的溶劑殘留(廢液瓶)是否充滿,。
13)如果分部收集器用來收集每個DMT脫保護步驟的流出物,,確保試管充分清潔干凈,并打開分部收集器,,確保DMT廢液管路通向分部收集器,。
14)啟動循環(huán),運行開始程序清洗試劑管路,,除去原來的試劑,。
注意:TritylOnAuto表示在合成寡核苷酸的5’端核苷酸帶有一個DMT,并將其從固相載體上切下來,,儲存在收集瓶中,;TritylOffAuto表示在合成寡核苷酸的5,端核苷酸沒有保護基團,,將其從固相載體上切下來,,儲存在收集瓶中;TritylOnManual表示合成寡核苷酸的5’端核苷酸帶有一個DMT,,寡核苷酸沒有從固相載體上切下來,,而是保留在合成柱中;TritylOffManual表示在合成寡核苷酸的5,,端核苷酸沒有保護基團,,寡核苷酸沒有從固相載體上切下來,,而是保留在合成柱中。
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