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測(cè)定意義：

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產(chǎn)生,，能催化水解木聚糖，也被稱(chēng)為戊聚糖酶或半纖維素酶，可分解釀造或飼料工業(yè)中的原料細(xì)胞壁以及β-葡聚糖,，降低釀造中物料的度,，促進(jìn)有效物質(zhì)的釋放,，以及降低飼料中的非淀粉多糖,，促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用，因而廣泛的應(yīng)用于釀造和飼料工業(yè)中,，ACX一般分離自耐酸的真菌,，細(xì)菌及部分霉菌,。

測(cè)定原理：

ACX在酸性環(huán)境下能將木聚糖降解成還原性寡糖和單糖,，進(jìn)一步在沸水浴條件下與3,5-二水楊酸發(fā)生顯色反應(yīng)，在540nm處有特征吸收峰,，反應(yīng)液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比,，通過(guò)測(cè)定反應(yīng)液在540nm吸光值增加速率，可計(jì)算ACX活力,。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：

天平,、常溫離心機(jī)、震蕩儀,、恒溫水浴鍋、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、微量石英比色皿/96孔板,。

試劑一：液體×1瓶，室溫保存,。

試劑二：液體×1瓶,，4℃保存,。              

試劑三：粉劑×2瓶，－20℃保存,。臨用前加入22mL試劑二,，現(xiàn)配現(xiàn)用。

試劑四：液體×1支,，4℃保存,。

1、組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織,，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿,。16000g，4℃離心20min,，取上清置冰上待測(cè),。

2、細(xì)菌,、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL試劑一）,，冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒,，間隔7秒,，總時(shí)間3min）；16000g,， 4℃離心20min,，取上清液置冰上待測(cè)。

3,、血清等液體：直接測(cè)定,。

（1）按照蛋白濃度計(jì)算

活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。

ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(Cpr×V樣)÷T

=1608×△÷Cpr

（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算

活性單位定義：25℃中每克組織每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位,。

ADH (nmol/min/g鮮重) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=1608×△A÷W

（3）按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

活性單位定義：25℃中每104個(gè)細(xì)胞每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位,。

ADH (nmol/min/104cell) =(△A÷ε÷d×V反總×109)÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T

=1608×△A ÷細(xì)胞數(shù)量

（4）按液體體積計(jì)算

活性單位定義：25℃中每毫升血清每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。

ADH (nmol/min/mL) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷V樣÷T

=1608×△A

ε：NADH摩爾消光系數(shù),，6.22×103L/mol/cm,；d：比色皿光徑，1 cm,；V反總：反應(yīng)體系總體積,，1000μL=0.001 L；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量，g,；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積,，100μL=0.1 mL,；T：反應(yīng)時(shí)間，1min,。