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商品屬性：

產品名稱：土壤堿性蛋白酶(SALPT)生化檢測試劑盒

規(guī)格：100管/48樣 50管/24樣 

貨號 : EY-01S1302

測試方法:微量法　可見分光光度法　　

分類：土壤系列

商品詳情：

測定意義：

土壤參與土壤中存在的氨基酸、蛋白質以及其他含蛋白質氮的有機化合物的轉化,，其水解產物是高等植物的氮源之一,。S-ALPT在堿性環(huán)境下催化蛋白質水解，與土壤有機質含量,、氮素及其他土壤性質有關,。

測定原理：

堿性條件下，S-ALPT可將酪蛋白水解產生,；在堿性條件下,，還原磷鉬酸化合物生成鎢藍；在680nm有特征吸收峰,。

實驗中所需儀器及設備：

可見分光光度計/酶標儀,、水浴鍋、磁力攪拌器,、可調式移液槍,、微量石英比色皿/96孔板、雙蒸水

ADH測定操作：

1. 分光光度計預熱30 min,，調節(jié)波長到340 nm,，蒸餾水調零。

2. 試劑三在25℃水浴中保溫30 min,。

3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL樣本上清液,、800μL試劑三和100μL試劑四，迅速混勻后于340nm測定吸光值變化，分別記錄15s和75s時吸光值,，分別記為A1和A2,。△A測定管=A1-A2,。

測定步驟：

1,、分光光度計預熱30min以上，調節(jié)波長至340nm,，蒸餾水調零,。

2、將試劑二在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴10min以上,。

3,、操作表：

將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中，混勻后立即在340 nm波長下記錄初始吸光度A1和反應1min后的吸光度A2,，計算ΔA=A1-A2,。

注意：若A1-A2大于0.5，需將樣本用提取液稀釋,，使A1-A2小于0.5,，可提高檢測靈敏度。計算公式中乘以相應稀釋倍數,。

NAD-MDH活力單位的計算：

1,、血清（漿）NAD-MDH活力的計算

單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

NAD-MDH（nmol/min/mL）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=6430×ΔA

2,、組織,、細菌或細胞中NAD-MDH活力的計算:

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

NAD-MDH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位,。

NAD-MDH（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W× V樣÷V樣總）÷T =6430×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位,。

NAD-MDH（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（2000×V樣÷V樣總）÷T=3.215×ΔA

V反總：反應體系總體積，8×10-4 L,；ε：NADH摩爾消光系數,，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑,，1cm,；V樣：加入樣本體積，0.02mL,；V樣總：加入提取液體積,，1 mL,；T：反應時間,，1 min；W：樣本質量，g,；Cpr：樣本蛋白質濃度,，mg/mL；2000：細胞或細菌總數,，2000萬,。

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