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商品屬性：

產(chǎn)品名稱：脲酶（UE）生化檢測試劑盒

規(guī)格：100管/48樣 50管/24樣 

貨號 : EY-01S1104

測試方法:微量法　可見分光光度法　　

分類：氮代謝系列

商品詳情：

測定意義：

UE能夠水解尿素，產(chǎn)生氨和碳酸。UE活性與有機物質(zhì)含量,、全氮和速效氮含量呈正相關(guān)，反應(yīng)了氮素狀況,。

測定原理：

利用靛酚藍比色法測定脲酶水解尿素產(chǎn)生的NH3-N,。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋,、可調(diào)式移液器,、微量石英比色皿/96孔板,、研缽、冰,、甲苯（不允許快遞）和蒸餾水,。

粗酶液提取：

1,、組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織,，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿。16000g,，4℃離心20min,，取上清置冰上待測。

2,、細菌,、真菌：按照細胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w,，超聲3秒,，間隔7秒，總時間3min）,；16000g,， 4℃離心20min，取上清液置冰上待測,。

3,、血清等液體：直接測定。

ADH測定操作：

1. 分光光度計預熱30 min,，調(diào)節(jié)波長到340 nm,，蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑三在25℃水浴中保溫30 min,。

3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL樣本上清液,、800μL試劑三和100μL試劑四，迅速混勻后于340nm測定吸光值變化,，分別記錄15s和75s時吸光值,，分別記為A1和A2?！鰽測定管=A1-A2,。

測定步驟：

1,、分光光度計預熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零,。

2,、將試劑二在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴10min以上,。

3、操作表：

將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中,，混勻后立即在340 nm波長下記錄初始吸光度A1和反應(yīng)1min后的吸光度A2,，計算ΔA=A1-A2。

注意：若A1-A2大于0.5,，需將樣本用提取液稀釋,，使A1-A2小于0.5，可提高檢測靈敏度,。計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù),。

NAD-MDH活力單位的計算：

1、血清（漿）NAD-MDH活力的計算

單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位,。

NAD-MDH（nmol/min/mL）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=6430×ΔA

2,、組織、細菌或細胞中NAD-MDH活力的計算:

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位,。

NAD-MDH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位,。

NAD-MDH（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W× V樣÷V樣總）÷T =6430×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

NAD-MDH（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（2000×V樣÷V樣總）÷T=3.215×ΔA

V反總：反應(yīng)體系總體積,，8×10-4 L,；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm,；d：比色皿光徑,，1cm；V樣：加入樣本體積,，0.02mL,；V樣總：加入提取液體積，1 mL,；T：反應(yīng)時間,，1 min；W：樣本質(zhì)量,，g,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL,；2000：細胞或細菌總數(shù),，2000萬。

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