日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

測定意義

S-NR催化土壤中硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,，是土壤硝態(tài)氮還原的關(guān)鍵酶。研究S-NR的活性對(duì)合理施肥,，降低氮素的損失具有重要意義,。

測定原理

S-NR催化硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，NO3ˉ +NADH+H＋→ NO2ˉ +NAD＋ +H 2 O,；產(chǎn)生的亞硝酸鹽能夠在酸性條件下,，與對(duì)–氨基苯磺酸及 α - 萘胺定量生成紅色偶氮化合物；生成的紅色偶氮化合物在 540 nm 有最大吸收峰,，可用分光光度法測定,。

需自備的儀器和用品

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋,、臺(tái)式離心機(jī),、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板,、研缽,、冰和蒸餾水。

試劑一：液體×1瓶,，室溫保存,。

試劑二：液體×1瓶，4℃保存,。              

試劑三：粉劑×2瓶,，－20℃保存。臨用前加入22mL試劑二,，現(xiàn)配現(xiàn)用,。

試劑四：液體×1支，4℃保存,。

1,、組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿,。16000g,，4℃離心20min,，取上清置冰上待測。

2,、細(xì)菌,、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w,，超聲3秒,，間隔7秒，總時(shí)間3min）,；16000g,， 4℃離心20min，取上清液置冰上待測,。

3,、血清等液體：直接測定。

（1）按照蛋白濃度計(jì)算

活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位,。

ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(Cpr×V樣)÷T

=1608×△÷Cpr

（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算

活性單位定義：25℃中每克組織每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位。

ADH (nmol/min/g鮮重) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=1608×△A÷W

（3）按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

活性單位定義：25℃中每104個(gè)細(xì)胞每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位,。

ADH (nmol/min/104cell) =(△A÷ε÷d×V反總×109)÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T

=1608×△A ÷細(xì)胞數(shù)量

（4）按液體體積計(jì)算

活性單位定義：25℃中每毫升血清每分鐘氧化1nmol NADH 為1個(gè)酶活單位,。

ADH (nmol/min/mL) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷V樣÷T

=1608×△A

ε：NADH摩爾消光系數(shù),，6.22×103L/mol/cm,；d：比色皿光徑，1 cm,；V反總：反應(yīng)體系總體積,，1000μL=0.001 L；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量，g,；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積,，100μL=0.1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間,，1min。