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商品屬性：

產(chǎn)品名稱：食品中亞硝酸鹽含量生化檢測(cè)試劑盒

規(guī)格：100管/96樣 50管/48樣 

貨號(hào) : EY-01S195

測(cè)試方法:微量法　可見分光光度法　　

分類：氮代謝系列

商品詳情：

測(cè)定意義：

在食品中,，亞硝酸鹽可與肉品中的肌紅素結(jié)合而更安定，在食品加工業(yè)中作為保色劑,，以維持肉制品的良好外觀,，并防止肉毒梭狀芽孢桿菌的產(chǎn)生，提高食用肉制品的安全,，但是人體長(zhǎng)期攝入亞硝酸鹽過量的食品,，可誘發(fā)消化系統(tǒng)癌變。

測(cè)定原理：

在酸性條件下,，亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸反應(yīng)生成重氮化合物,，再與N-1-萘基乙二胺形成紫紅色偶氮化合物，在540nm處有特征吸收峰,。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：

天平,、研缽或勻漿器、水浴鍋,、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。

粗酶液提?。?br/>

1,、組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿,。16000g,，4℃離心20min，取上清置冰上待測(cè),。

2,、細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL試劑一）,，冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w,，超聲3秒，間隔7秒,，總時(shí)間3min）,；16000g， 4℃離心20min,，取上清液置冰上待測(cè),。

3、血清等液體：直接測(cè)定,。

ADH測(cè)定操作：

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm，蒸餾水調(diào)零,。

2. 試劑三在25℃水浴中保溫30 min,。

3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL樣本上清液、800μL試劑三和100μL試劑四,，迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,，分別記錄15s和75s時(shí)吸光值，分別記為A1和A2,?！鰽測(cè)定管=A1-A2。

測(cè)定步驟：

1,、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零,。

2,、將試劑二在37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）水浴10min以上。

3,、操作表：

將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中,，混勻后立即在340 nm波長(zhǎng)下記錄初始吸光度A1和反應(yīng)1min后的吸光度A2,，計(jì)算ΔA=A1-A2。

注意：若A1-A2大于0.5,，需將樣本用提取液稀釋,，使A1-A2小于0.5，可提高檢測(cè)靈敏度,。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù),。

NAD-MDH活力單位的計(jì)算：

1、血清（漿）NAD-MDH活力的計(jì)算

單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位,。

NAD-MDH（nmol/min/mL）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=6430×ΔA

2,、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中NAD-MDH活力的計(jì)算:

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位,。

NAD-MDH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算：

單位的定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位,。

NAD-MDH（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W× V樣÷V樣總）÷T =6430×ΔA÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：

單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。

NAD-MDH（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（2000×V樣÷V樣總）÷T=3.215×ΔA

V反總：反應(yīng)體系總體積,，8×10-4 L,；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm,；d：比色皿光徑，1cm,；V樣：加入樣本體積,，0.02mL；V樣總：加入提取液體積,，1 mL,；T：反應(yīng)時(shí)間，1 min,；W：樣本質(zhì)量,，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL,；2000：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，2000萬(wàn),。

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