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商品屬性：

產品名稱：半胱氨酰亞砜裂解酶（CSL)生化檢測試劑盒

規(guī)格：100管/48樣 50管/24樣 

貨號 : EY-01S1115

測試方法:微量法　可見分光光度法　　

分類：氨基酸代謝系列

商品詳情：

測定意義

半胱氨酰亞砜裂解酶（CSL）廣泛存在于百合科蔥屬(如大蒜和洋蔥)，十字花科蕓薹屬

(如卷心菜,，菜花,，西蘭花)，以及豆科中的合金歡屬中,，并通常被稱為蒜氨酸酶(Alliinase),。香菇酸在γ-谷氨酰轉肽酶和半亞砜裂解酶的作用下轉化成香菇精，以及產生丙酮酸,、乙醛,、甲醛和NH3,。CSL是內源性甲醛生成的關鍵酶之一，測定CSL活性對于研究食品安全具有重要意義,。

測定原理

CSL催化S-甲基-L-半亞砜反應產生丙酮酸,，與2,4-苯肼反應，在堿性條件下顯棕紅色,，在510nm下有特征吸收峰,。

自備實驗用品及儀器

天平、研缽,、離心機,、酶標儀、96孔板,、恒溫水浴鍋,、蒸餾水。

粗酶液提?。?br/>

1,、組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿,。16000g,，4℃離心20min，取上清置冰上待測,。

2,、細菌、真菌：按照細胞數量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL試劑一）,，冰浴超聲波破碎細胞（功率300w,，超聲3秒，間隔7秒,，總時間3min）；16000g,， 4℃離心20min,，取上清液置冰上待測。

3,、血清等液體：直接測定,。

ADH測定操作：

1. 分光光度計預熱30 min，調節(jié)波長到340 nm,，蒸餾水調零,。

2. 試劑三在25℃水浴中保溫30 min。

3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL樣本上清液,、800μL試劑三和100μL試劑四,，迅速混勻后于340nm測定吸光值變化,，分別記錄15s和75s時吸光值，分別記為A1和A2,?！鰽測定管=A1-A2。

測定步驟：

1,、分光光度計預熱30min以上,，調節(jié)波長至340nm，蒸餾水調零,。

2,、將試劑二在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴10min以上。

3,、操作表：

將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中,，混勻后立即在340 nm波長下記錄初始吸光度A1和反應1min后的吸光度A2，計算ΔA=A1-A2,。

注意：若A1-A2大于0.5,，需將樣本用提取液稀釋，使A1-A2小于0.5,，可提高檢測靈敏度,。計算公式中乘以相應稀釋倍數。

NAD-MDH活力單位的計算：

1,、血清（漿）NAD-MDH活力的計算

單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位,。

NAD-MDH（nmol/min/mL）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=6430×ΔA

2、組織,、細菌或細胞中NAD-MDH活力的計算:

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位,。

NAD-MDH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位。

NAD-MDH（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W× V樣÷V樣總）÷T =6430×ΔA÷W

半胱氨酰亞砜裂解酶（CSL)生化檢測試劑盒（3）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個酶活力單位,。

NAD-MDH（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（2000×V樣÷V樣總）÷T=3.215×ΔA

V反總：反應體系總體積,，8×10-4 L；ε：NADH摩爾消光系數,，6.22×103 L / mol /cm,；d：比色皿光徑，1cm,；V樣：加入樣本體積,，0.02mL；V樣總：加入提取液體積,，1 mL,；T：反應時間，1 min,；W：樣本質量,，g,；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL,；2000：細胞或細菌總數,，2000萬。

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