日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

ChIP的一般流程：

    甲醛處理細胞---收集細胞，超聲破碎---加入目的蛋白的抗體,，與靶蛋白-DNA復(fù)合物相互結(jié)合---加入ProteinA,，結(jié)合抗體-靶蛋白-DNA復(fù)合物，并沉淀---對沉淀下來的復(fù)合物進行清洗,，除去一些非特異性結(jié)合---洗脫,，得到富集的靶蛋白-DNA復(fù)合物---解交聯(lián)，純化富集的DNA-片斷---PCR分析,。

    在PCR分析這一塊,，比較傳統(tǒng)的做法是半定量-PCR。但是現(xiàn)在隨著熒光定量PCR的普及,，大家也越來越傾向于Q-PCR了,。此外還有一些由ChIP衍生出來的方法,。例如RIP（其實就是用ChIP的方法研究細胞內(nèi)蛋白與RNA的相互結(jié)合，具體方法和ChIP差不多,，只是實驗過程中要注意防止RNase,，zui后分析的時候需要先將RNA逆轉(zhuǎn)錄成為cDNA）；還有ChIP-chip（其實就是ChIP富集得到的DNA-片段,，拿去做芯片分析,，做法在ChIP的基礎(chǔ)上有所改變，不同的公司有不同的做法,，要根據(jù)公司的要求來準(zhǔn)備樣品）,。細胞

第二天：

（一）、免疫復(fù)合物的沉淀及清洗,。

12,、孵育過后，每管中加入60ulProteinAAgarose/SalmonSpermDNA,。4oC顛轉(zhuǎn)2h,。

13、4oC靜置10min后,，700rpm離心1min,。除去上清。

14,、依次用下列溶液清洗沉淀復(fù)合物,。清洗的步驟：加入溶液，在4oC顛轉(zhuǎn)10min,，4oC靜置10min沉淀，700rpm離心1min,，除去上清,。

洗滌溶液：a.low salt wash buffer-one wash

b.highsalt wash buffer-one wash

c.LiCl wash buffer-one wash

d.TE buffer-two wash

15、清洗完畢后,，開始洗脫,。洗脫液的配方：100ul10%SDS，100ul1MNaHCO3,，800ulddH2O,，共1ml。

    每管加入250ul洗脫buffer,，室溫下顛轉(zhuǎn)15min,，靜置離心后，收集上清,。重復(fù)洗滌一次,。zui終的洗脫液為每管500ul,。細胞

16、解交聯(lián)：每管中加入20ul 5M NaCl（NaCl終濃度為0.2M）,。

混勻,，65oC解交聯(lián)過。