在ELISA試劑盒測定時(shí),,受檢標(biāo)本與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng),。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),,故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。拋開品牌,、價(jià)格來說,。
選擇ELISA試劑盒首要考慮這幾個(gè)條件:
1、編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),,每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2 孔,、陽性對(duì)照 2 孔,、空白對(duì)照 1孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)
2,、加樣:分別在陰,、陽性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽性對(duì)照 50?l,。然后在待測樣品孔先 加樣品稀釋液 40?l,,然后再加待測樣品 10?l。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,,盡量不 觸及孔壁,,小鼠ELISA試劑盒輕輕晃動(dòng)混勻。
3,、溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘,。
4、配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5,、洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,甩干,,每孔加滿洗滌液,,靜置 30 秒后棄去,如此 重復(fù) 5 次,,拍干,。
測定標(biāo)準(zhǔn)濃度的抗原ELISA試劑盒反應(yīng)的光密度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。測得待測樣品ELISA試劑盒反應(yīng)的光密度,,從而查得抗原量,。在標(biāo)記抗原競爭法中,定酶標(biāo)記抗原的酶活性為100%,,在加入作為標(biāo)準(zhǔn)樣品的未標(biāo)記抗原后,,以酶活性降低的百分率繪制曲線,從曲線上查得待測抗原的量,。至于對(duì)抗體的定量,,則要繪制出競爭抵制曲線。在制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí),,需進(jìn)行空白對(duì)照測定,,進(jìn)行校正?;蛘咴跍y定時(shí),,將對(duì)照液作為零點(diǎn)測定點(diǎn)。
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