Il-8是一種分子量為8～10kD的多肽,，對嗜中性粒細胞，T淋巴細胞,、嗜鹼性粒細胞具有趨化作用,，并可激活嗜中性粒細胞，是一種重要的炎癥介質,。在嚴重感染病人的血清中,、炎癥局部滲出液中都可檢測到高水平的IL-8。此外,，近年來的研究表明,，IL-8可能與各種組織缺血后再灌注損傷的發(fā)生有關。研究人員采用兩株自制的單克隆抗體建立了夾心法ELISA用于檢測IL-8,，敏感性可156Pg/ml,。
相關專題ELISA免疫實驗技術
Il-8是一種分子量為8～10kD的多肽，對嗜中性粒細胞,，T淋巴細胞,、嗜鹼性粒細胞具有趨化作用，并可激活嗜中性粒細胞,，是一種重要的炎癥介質,。在嚴重感染病人的血清中、炎癥局部滲出液中都可檢測到高水平的IL-8,。此外,，近年來的研究表明，IL-8可能與各種組織缺血后再灌注損傷的發(fā)生有關,。我們采用兩株自制的單克隆抗體建立了夾心法ELISA用于檢測IL-8,，敏感性可達156Pg/ml，操作簡單,，重復性良好,，可用于IL-8的基礎和臨床研究。
一,、原理：采用兩株識別不同表位的抗IL-8單克隆抗體,，其中一株(4D7)作為包被抗體,，以識別和結
合待檢標本中的IL-8,另一株作為酶標抗體，與結合于包被抗體的IL-8的另一個表位結合并催化底物顯色,。
二,、試劑器材
1. 試劑盒提供包被抗體、酶標抗體,、標準品,，底物(ABTS)、96孔elisa板,。
2. 包被緩沖液,、PBS、底物緩沖液配制同常規(guī)ELISA法,。
三,、操作步驟：
1. 包被：pH9.5 碳酸鹽緩液稀釋4D7單克隆抗體粗提γ球蛋白至1μg/ml,加入96孔板,100μl/孔，放4℃,36小時,。
2. 封閉：0.1%吐溫PBS(Buffer A)沖洗96孔板三次,，加3%BSA Buffer A(Buffer B)200μl/孔，放37℃,1小時,。
3. 加待檢樣品：Buffer A 沖洗96孔板三次,，加待檢樣品及Buffer B 稀釋的標準品100μl/孔，放37℃,3小時,。
4. 加酶標抗體：Buffer A沖洗96孔板五次,3%PEG Buffer A稀釋酶標抗體至1∶800,，加入96孔板，100μl/孔,，放37℃,1小時,。
5. 顯色：Buffer A沖洗96孔板五次，pH5.4檸檬酸緩沖液溶解底物(ABTS),0.2mg/ml,加3%H2O2,2μl/ml,，加入96孔板,，100μ/孔，室溫下或37℃顯色,。
四,、注意事項：
1. 待檢標本如為血清，應采用一次性容器,，血液采集后盡快(6小時以內)分離血清,。
2. 封閉液或抗體稀釋液應新鮮配制或凍存。
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