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1. 選用原代細胞生長狀態(tài)好（90-95%）,，生長數(shù)量大于5×105進行傳代,。
 
2. 吸除原代細胞培養(yǎng)液,。用含雙抗的1×PBS（pH7.4）清洗細胞培養(yǎng)瓶2次。
 
3. 1ml細胞消化液加入細胞培養(yǎng)瓶,，輕輕搖動,，使細胞消化液覆細胞培養(yǎng)瓶底。
 
4. 細胞培養(yǎng)瓶置于5%CO2,、95%空氣,、37oC培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)數(shù)分鐘后，在顯微鏡下觀察原代細胞的消化狀態(tài),。
 
請記?。喝缳N壁細胞逐漸趨于圓形、部分懸浮后,，用手指輕輕拍打細胞培養(yǎng)側(cè)部或底部至大部分貼壁細胞懸浮，加入細胞終止液,，終止細胞消化,。每種原代細胞的消化時間是有差異的。
 
5. 吹打培養(yǎng)瓶中懸浮細胞若干次,，再吸出細胞懸浮液,，轉(zhuǎn)入15ml離心管中，1000rpm離心5分鐘,。
 
6. 棄離心管中液體,，加入原代細胞培養(yǎng)液重懸細胞。細胞計數(shù),，確定細胞數(shù)量,。
 
    細胞分瓶后，加入適量原代細胞培養(yǎng)液至細胞培養(yǎng)瓶中,，置于5%CO2,、95%空氣、37oC培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)24小時,。