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　　12月24日，The Scientist評(píng)選出了“Top Technical Advances 2015”,，成像,、光遺傳學(xué)、單細(xì)胞分析以及基因編輯技術(shù)CRISIPR入選,。那么,，我們就一起看看這四大技術(shù)在過(guò)去的一年中都取得了哪些進(jìn)展吧。

　　成像

　　今年,，生命科學(xué)的成像領(lǐng)域打破了過(guò)去的壁壘,，科學(xué)家們通過(guò)顯微鏡學(xué)方法越來(lái)越深入的觀察到了生命組織。

　　在過(guò)去的十年里,，一種稱(chēng)作為體內(nèi)振動(dòng)光譜成像（vibrational spectroscopicimaging）的技術(shù)一直被用來(lái)捕捉一些活體組織中蛋白質(zhì),、脂類(lèi),、核酸和其他分子的活動(dòng)。盡管這一技術(shù)可在無(wú)需熒光標(biāo)記的條件下顯影組織,，但它仍然太慢而無(wú)法適用于大多數(shù)的研究和臨床應(yīng)用,。

　　10月30日，Purdue大學(xué)的科學(xué)家們報(bào)告稱(chēng),，他們利用體內(nèi)振動(dòng)光譜成像技術(shù)大大提高了收集圖片的速度（從分到秒）,。新技術(shù)zui關(guān)鍵的改進(jìn)是不再需要收集分子振動(dòng)信號(hào)的光譜儀。取而代之的是,，這一改進(jìn)的技術(shù)在光子進(jìn)入組織前會(huì)對(duì)其進(jìn)行顏色編碼,。

　　該研究的通訊作者 Ji-Xin Cheng 說(shuō)：“我們的想法是在將光子發(fā)送到組織前，用不同的兆赫頻率進(jìn)行顏色編碼,。通過(guò)這樣的方式,，我們能夠在幾十微妙內(nèi)收集漫射光子，并通過(guò)編碼頻率和光顏色之間的一一對(duì)應(yīng)檢索光譜,。”

　　同一個(gè)月,，發(fā)表在《Nature Methods》上的一項(xiàng)研究中，霍華德休斯醫(yī)學(xué)研究所Philipp Keller領(lǐng)導(dǎo)的研究小組發(fā)明的一款新型顯微鏡讓科學(xué)家們能夠更加清晰,、全面的觀察活體動(dòng)物的生物過(guò)程,。

　　這款顯微鏡能夠產(chǎn)生完整的、不透明生物體的圖像,，包括斑馬魚(yú)或果蠅的胚胎,，在三個(gè)維度都有足夠的分辨率，每個(gè)細(xì)胞都能展現(xiàn)出明顯的結(jié)構(gòu),。更重要的是,，它能夠觀察到胚胎發(fā)育過(guò)程中細(xì)胞的移動(dòng)，還能夠監(jiān)測(cè)大腦活動(dòng),。研究人員用它記錄了果蠅神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的過(guò)程,，zui終共有10,000個(gè)細(xì)胞。

　　光遺傳學(xué)

　　今年11月,，MIT的Edward Boyden和斯坦福大學(xué)的Karl Deisseroth因他們?cè)诠膺z傳學(xué)領(lǐng)域的工作獲得了表彰,。光遺傳學(xué)技術(shù)是指通過(guò)光線來(lái)操控神經(jīng)元，科學(xué)家們一直在不斷的改進(jìn)這一技術(shù)。

　　本月前,，在芝加哥舉行的神經(jīng)科學(xué)學(xué)會(huì)會(huì)議上,，Deisseroth等人提出了全光電生理學(xué)（all-optical electrophysiology）的升級(jí)版。哈佛大學(xué)Adam Cohen和他的團(tuán)隊(duì)開(kāi)發(fā)出了一種reporter,，當(dāng)引入到細(xì)胞中去時(shí),，在電壓發(fā)生改變的情況下會(huì)發(fā)出紅外線。Cohen與Boyden一起,，將電壓指示器與一種響應(yīng)藍(lán)光的膜通道一起導(dǎo)入到了細(xì)胞中,，這使得研究人員能夠用藍(lán)光開(kāi)啟細(xì)胞，用紅外線記錄它們的活動(dòng),。

　　今年6月,，發(fā)表在《科學(xué)》雜志上的一項(xiàng)研究中，研究人員在海藻中發(fā)現(xiàn)了一種紫紅質(zhì)通道蛋白（channelrhodopsin）,，與先前開(kāi)發(fā)的工程通道相比,，它能夠更快地抑制神經(jīng)元活動(dòng)?？茖W(xué)家們還開(kāi)發(fā)出了一種對(duì)在光遺傳學(xué)控制下神經(jīng)元作出即時(shí)反饋的方法,，維持它們的活性在一個(gè)理想的狀態(tài)。這一“神經(jīng)恒溫器”（neuro thermostat）可在24小時(shí)內(nèi)控制細(xì)胞的firing rate常數(shù),。

　　單細(xì)胞分析

　　近年來(lái),，單細(xì)胞分析蓬勃發(fā)展，研究成果不斷涌出,，技術(shù)也越來(lái)越,。今年，通過(guò)單細(xì)胞分析,，科學(xué)家們鑒定出了一個(gè)新的細(xì)菌們，檢測(cè)了小鼠腸道內(nèi)zui珍貴的細(xì)胞類(lèi)型,。5月,，發(fā)表在《細(xì)胞》雜志上的兩項(xiàng)研究使單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)有了一個(gè)相當(dāng)大的飛躍，并行檢測(cè)的細(xì)胞數(shù)量從約100增加到了幾千,。

　　哈佛大學(xué)的Marc Kirschner和Steve McCarrol實(shí)驗(yàn)室開(kāi)發(fā)出了一些高通量技術(shù),，能夠在樣本進(jìn)入到攪拌器中去之前，快速,、輕松,、廉價(jià)地賦予每個(gè)細(xì)胞*的遺傳條形碼。研究小組希望他們的技術(shù)將能夠幫助生物學(xué)家們更深入地發(fā)現(xiàn)和分類(lèi)機(jī)體中的細(xì)胞類(lèi)型，繪制出大腦一類(lèi)復(fù)雜組織中的細(xì)胞多樣性圖譜,，更好地了解干細(xì)胞分化,，以及獲得更多有關(guān)疾病遺傳學(xué)的認(rèn)識(shí)。

　　兩個(gè)研究小組各自開(kāi)發(fā)了一些方法利用微珠將大量不同的DNA條形碼同時(shí)傳送到幾十萬(wàn)納米大小的液滴中,。兩種方法都利用了微流體裝置來(lái)將細(xì)胞和微珠一起裝入這些液滴中,。這些液滴是在一個(gè)小型裝配線上生成，沿著一根頭發(fā)寬的槽道流動(dòng),。微珠條形碼附著到每個(gè)細(xì)胞的一些基因上,，因此科學(xué)家們可以一批次測(cè)序所有的基因，追蹤每個(gè)基因的來(lái)源細(xì)胞,。

　　CRISPR

　　我們熟知的基因編輯工具CRISPR不斷帶來(lái)新的研究成果,，在許多研究人員利用CRISPR的同時(shí)，其他一些人則專(zhuān)注于改進(jìn)這一技術(shù),。

　　6月15日,，發(fā)表在《Nature Biotechnology》上的一項(xiàng)研究中，科學(xué)家們結(jié)合CRISPR與光遺傳學(xué)構(gòu)建出了一種系統(tǒng)：一種光激活的新型Cas9核酸酶使得研究人員能夠在空間和時(shí)間上更好地控制RNA引導(dǎo)的核酸酶的活性,。

　　研究人員通過(guò)首先將Cas9蛋白分成兩個(gè)失活的片段構(gòu)建出了paCas9,。隨后他們讓每個(gè)片段連接一個(gè)光控開(kāi)關(guān)蛋白Magnet。當(dāng)受到藍(lán)光照射時(shí),，兩個(gè)Magnet蛋白結(jié)合到一起,，分開(kāi)的Cas9片段隨之結(jié)合重建出了RNA引導(dǎo)的Cas9核酸酶活性。重要的是,，這一過(guò)程是可逆的：當(dāng)切斷光線時(shí),，paCas9核酸酶會(huì)再度分裂，核酸酶活性終止,。

　　Cas9酶是基因編輯系統(tǒng)中一個(gè)非常關(guān)鍵的組成部分,，而脫靶效應(yīng)一直是CRISPR技術(shù)需要克服的重大技術(shù)問(wèn)題。11月30日,，發(fā)表在《科學(xué)》雜志上的一項(xiàng)研究中,，麻省理工學(xué)院-哈佛醫(yī)學(xué)院Broad研究所CRISPR大神張鋒的研究小組又取得了一項(xiàng)突破性的成果。研究人員通過(guò)創(chuàng)建了3個(gè)新版本的Cas9酶大大降低了CRISPR/Cas9系統(tǒng)的脫靶效應(yīng),；有效改善了這一技術(shù)的zui大局限性之一,。

　　4月1日,，發(fā)表在《自然》雜志上的一項(xiàng)研究中，張鋒研究小組還鑒別出了一種更小的Cas9核酸酶版本,。zui常使用的Cas9酶源自化膿性鏈球菌（SpCas9）,，因太大而無(wú)法裝入到腺病毒載體中。這項(xiàng)研究中介紹了一種來(lái)自金黃色葡萄球菌的Cas9核酸酶（saCas9）,，它比SpCas9小25%,，從而為腺病毒的包裝問(wèn)題提供了一個(gè)解決方案。并未參與這項(xiàng)研究的杜克大學(xué)的 Charles Gersbach 說(shuō)：“真正讓人興奮的是saCas9在體內(nèi)真的能發(fā)揮作用,。”

　　同月6日,，Gersbach和同事們也在《Nature Biotechnology》發(fā)表了他們的研究成果。研究人員結(jié)合一種組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶與Cas9構(gòu)建出了一種表觀遺傳編輯器,。他們破壞了Cas9切割DNA的能力,，轉(zhuǎn)而利用它作為一種自動(dòng)引導(dǎo)裝置到達(dá)基因組中的正確位點(diǎn)，并通過(guò)組蛋白乙?；瘉?lái)啟動(dòng)基因,。

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