產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

氨基酸(AA)檢測(cè)試劑盒(茚三酮比色法)(Amino Acid Assay kit)檢測(cè)原理是在弱酸條件下,，氨基酸與茚三酮共熱情況下能定量的產(chǎn)生藍(lán)紫色的二酮茚胺(又稱(chēng)Ruhemans紫),，其吸收峰在波長(zhǎng)570nm處，在一定范圍內(nèi)顏色深淺(即吸光度)與氨基酸濃度成正比,，該試劑盒主要用于檢測(cè)血清,、尿液、植物組織,、食品,、藥品等中的總游離氨基酸含量。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域,，不宜用于臨床診斷或其他用途,。 

自備材料：

1,、無(wú)氨蒸餾水或去離子水、60%乙醇

2,、水浴鍋或恒溫箱,、研缽或勻漿器

3、離心機(jī),、離心管或試管

4,、比色杯、分光光度計(jì)

操作步驟(僅供參考)：

1,、配制 AA Lysis buffer (1×)：取 1 份 AA Lysis buffer (5×)加 4 份去離子水混勻即成,。

1、準(zhǔn)備樣品：

①植物樣品：取新鮮植物組織,，清洗干凈,，擦干，切碎,，迅速稱(chēng)取 0.4g,，按植物組織：AA Lysis buffer(1×)=0.4g：2.0ml的比例加入AA Lysis buffer(1×)勻漿或研磨，用無(wú)氨蒸餾水稀釋至40ml,，混勻,，用濾紙過(guò)濾，濾液即為氨基酸粗提液,，4℃保存?zhèn)溆谩?/span>

②血漿,、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒的測(cè)定,，-20℃凍存,，用于氨基酸的檢測(cè)。

③細(xì)胞或組織樣品：取恰當(dāng)細(xì)胞或組織裂解液,，如有必要用AA Lysis buffer(1×)進(jìn)行勻漿,，1000g離心5min，留取上清即為氨基酸粗提液,，4℃保存,，用于氨基酸檢測(cè)。

④高濃度樣品：如果樣品中含有較高濃度的氨基酸,，可以使用AA Lysis buffer(1×)進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>

2,、配制茚三酮顯色液:取0.3g茚三酮，溶解于50ml茚三酮稀釋液,，攪拌至溶解,，即為茚三酮顯色液。4℃避光保存，30天有效,。注意：茚三酮顯色液30天用不完,，應(yīng)丟棄，重新配制,。可稱(chēng)取一定量的茚三酮再加稀釋液使終濃度為0.6%即可,。

3,、配制茚三酮工作液: 取適量的茚三酮顯色液、AA Assay buffer,，按茚三酮顯色液：    AA Assay buffer=35：3的比例混合,，即為茚三酮工作液，4℃避光密閉保存,，2周有效,。注意：AAAssay buffer所含物質(zhì)濃度較高，且有刺激性,，如有結(jié)晶或沉淀,，應(yīng)于40~70℃密閉溫育，使其溶解后使用,。

4,、配制維生素C工作液: 取出1支維生素C，準(zhǔn)確溶解于30ml無(wú)氨蒸餾水,，混勻,，4℃預(yù)冷備用，-20℃保存1周有效,。該試劑盒提供的維生素C及其配制的工作液為過(guò)量,。

注意事項(xiàng)：

1、實(shí)驗(yàn)材料應(yīng)盡量新鮮,，如取材后不立即測(cè)定,，應(yīng)存于4℃。

2,、實(shí)驗(yàn)中用水盡量保證不被氨污染,，否則會(huì)強(qiáng)烈干擾反應(yīng)。

3,、如果樣品中含有大量蛋白質(zhì)或多肽也會(huì)影響結(jié)果的準(zhǔn)確性,，應(yīng)先用蛋白沉淀劑去除而后檢測(cè)，一般常用乙酸,、磺基水楊酸,、三等作為沉淀劑。AA Lysis buffer有蛋白沉淀劑的功能。

4,、氨基酸與茚三酮顯色反應(yīng)可用沸水浴15min,，但易退色；在80℃水浴中孵育,，并適當(dāng)延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間,，可增強(qiáng)顯色效果。產(chǎn)生的藍(lán)紫色產(chǎn)物在1h內(nèi)保持穩(wěn)定,，建議盡快檢測(cè),。

5、脯氨酸或羥脯氨酸的檢測(cè),，建議使用脯氨酸(PRO)檢測(cè)試劑盒(茚三酮比色法),。

6、AA Lysis buffer(5×)和AA Assay buffer有腐蝕性和揮發(fā)性,，應(yīng)小心操作,，同時(shí)應(yīng)密閉保存，防止揮發(fā),。

7,、空氣中的氧有可能干擾顯色反應(yīng)，盡量隔絕空氣,。

8,、加入維生素C可提高反應(yīng)的靈敏度，并使顏色穩(wěn)定,，但加入過(guò)量,，將導(dǎo)致吸光度人為偏大，應(yīng)嚴(yán)格掌握加入的量,。

9,、如果沒(méi)有分光光度計(jì)，也可以使用酶標(biāo)儀測(cè)定,，但應(yīng)考慮酶標(biāo)儀的最大檢測(cè)體積,。

10、所測(cè)樣品的濃度過(guò)高時(shí),，應(yīng)用AA Lysis buffer稀釋樣品后重新測(cè)定,。

有效期：6個(gè)月有效。4℃運(yùn)輸,，氨基酸標(biāo)準(zhǔn)收貨后應(yīng)-20℃保存,。