產(chǎn)品簡介：

Bradford Protein Assay Kit 檢測原理是在酸性乙醇溶液中考馬斯亮藍G250與蛋白結(jié)合顏色由棕色變?yōu)樗{色,，在595nm有最大吸收值，檢測速度很快,，少量樣品一般只需10min 即可完成檢測,，檢測濃度下限達到25μg/ml，最小檢測蛋白量達到0.5μg,，待測樣品體積為1～20μl,，在50~1000μg/ml濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域,，不宜用于臨床診斷或其他用途,。

自備材料：

1、酶標(biāo)儀或分光光度計,、96 孔板或比色杯,、電子天平、研缽或勻漿器,、離心機,、離心管

2,、蒸餾水、0.9%NaCl 或PBS

操作步驟(僅供參考)：

1,、樣品蛋白質(zhì)的提?。悍Q取新鮮綠豆芽下胚軸(或小麥葉片)0.5~1.0g放入研缽中，加2mL蒸餾水研磨成勻漿,，轉(zhuǎn)移到離心管中,，再用6mL蒸餾水分次洗滌研缽，洗滌液收集于同離心管中,，在室溫(20~25℃)下放置0.5~1h以充分提取,，然后4000r/min 離心20min去沉淀，上清液轉(zhuǎn)入10mL容量瓶,，以蒸餾水定容至刻度,，即得待測樣品提取液。

2,、取1ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液加入到含有 20mg的蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA)中,，充分溶解，后配制成20mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液,，配制后可立即使用,，配制的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)-20℃保存。

3,、取適量的20mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn),，用蛋白標(biāo)準(zhǔn)稀釋液稀釋至終濃度為500μg/ml 或所需濃度，如取25μl 20mg/ml 蛋白標(biāo)準(zhǔn),，加入975μl蛋白標(biāo)準(zhǔn)稀釋液,，充分混勻，即配制成500μg/ml 蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液,。特別提示：待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中,，蛋白標(biāo)準(zhǔn)也宜溶解于什么樣的稀釋液中，例如待測蛋白溶解于蔗糖中,，亦取20mg/ml 蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶解于蔗糖中,；一般也可以用 0.9%NaCl或PBS作為溶解BSA稀釋液，稀釋后的500μg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液也應(yīng)-20℃長期保存,。
4,、將標(biāo)準(zhǔn)品按 0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20μl 加到 96 孔板或EP管中,，加蛋白標(biāo)準(zhǔn)稀釋液補足至20μl,。
5、加適當(dāng)體積樣品到96孔板或EP管中,，補蛋白標(biāo)準(zhǔn)稀釋液至20μl,。
6,、各孔加入200μl G250染色液，室溫放置3～5min,。
7,、酶標(biāo)儀或分光光度計測定595nm 波長處的吸光度，560~610nm之間的波長也可,，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣品中的蛋白濃度,。
注意事項：
1、 G250染色液恢復(fù)至室溫充分混勻后使用,，有利于提高檢測的靈敏度,，加完G250染色液后，盡量在30min 內(nèi)完成吸光度的測定,，防止沉淀形成后影響實驗結(jié)果,。
2、 蛋白標(biāo)準(zhǔn)在全部溶解后先混勻,，再稀釋成一系列不同濃度的蛋白標(biāo)準(zhǔn),。
3、 待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中,，蛋白標(biāo)準(zhǔn)也應(yīng)溶解于什么樣的稀釋液中,，否者待測蛋白與蛋白標(biāo)準(zhǔn)中所含非蛋白成分不一致，有可能導(dǎo)致測定不準(zhǔn)確,。
4,、 建議每次測定時都做標(biāo)準(zhǔn)曲線，因為測定時顏色會隨著時間的延長不斷加深,，并且顯色反應(yīng)的速度和溫度有關(guān),，所以除非精確控制顯色反應(yīng)的時間和溫度，否則如需精確測定 應(yīng)每次都做標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
5,、 沒有酶標(biāo)儀，也可使用分光光度計測定,，但應(yīng)考慮比色杯的最小檢測體積,，需按比例適當(dāng)加大G250染色液、樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的用量使總體積不小于最小檢測體積,，使用分光光度計測定蛋白濃度時,，每個試劑盒可以測定的樣品數(shù)量可能會顯著減少。
6,、 用比色杯測定蛋白含量時,，由于考馬斯亮藍易結(jié)合石英比色杯，應(yīng)優(yōu)先選用一次性塑料比色杯，如用玻璃比色杯,，比色完畢應(yīng)立即用乙醇清洗干凈,。
7、 為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作,。
8、 試劑開封后請盡快使用,，以防影響后續(xù)實驗效果,。

有效期：12個月有效，蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制成溶液后應(yīng)-20℃凍存,。