簡介：

PEG1450溶液(50%,無菌)主要由 PEG1450(CAS號25322-68-3),、磷酸鹽等組成,，其作用原理使能夠改變各類細(xì)胞的膜結(jié)構(gòu),，使兩細(xì)胞接觸點(diǎn)處質(zhì)膜的脂類分子發(fā)生疏散和重組，兩細(xì)胞接口處在雙分子層質(zhì)膜的相互親和以及彼此的表面張力作用下,，細(xì)胞發(fā)生融合,。PEG1450溶液(50%,無菌)可用作融合劑，以獲得生產(chǎn)單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞,，誘導(dǎo)細(xì)胞雜交,，該試劑同Sigma P7181產(chǎn)品，經(jīng)嚴(yán)格無菌處理,。該試劑僅用于科研領(lǐng)域,，不適用于臨床診斷或其他用途。

自備材料：

1,、MEM 培養(yǎng)基,、胎牛血清

2、CO2 培養(yǎng)箱,、離心機(jī)

3,、HAT、HT,、A Media Supplement

4,、胰蛋白酶消化液

操作步驟(僅供參考)：
1、如果變成膠凍狀,，可 37~60℃水浴使其變成溶液,。 

2、單層貼壁細(xì)胞：將雜交前體細(xì)胞以相同數(shù)量(5×104/ml)接種,，以適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞,，待細(xì)胞貼壁擴(kuò)展至匯合成片(80%匯合率)的密度，吸干培養(yǎng)液,，加入2ml PEG1450溶液(50%,無菌),，輕輕轉(zhuǎn)動1min 使PEG1450溶液覆蓋所有細(xì)胞，靜置1min,，加入5mlMEM培養(yǎng)液以稀釋 PEG1450溶液,，吸干凈稀釋的 PEG1450溶液，再用 5ml MEM 培養(yǎng)液洗滌被 PEG 處理的細(xì)胞,，吸干凈洗液,，加入5ml MEM 培養(yǎng)液，37℃,，5%CO2 培養(yǎng)過夜,；24~48h后先吸去培養(yǎng)液，加入胰酶消化液處理細(xì)胞,，待細(xì)胞消化后吸除胰酶消化液,，用 HAT 選擇培養(yǎng)剔除 HPRT和TK缺陷細(xì)胞,；棄上清液，用補(bǔ)加1×HT 和 1×A的培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,，融合12~24h 后進(jìn)行異核體分析,，雜交前體細(xì)胞在4~5天內(nèi)發(fā)生死亡，對于大多數(shù)融合前體細(xì)胞而言,，10~14天可見雜交細(xì)胞克隆,。
3、懸浮細(xì)胞：將兩種不同親體的細(xì)胞各1ml(約為 1×107)混勻,，800g 離心10min 以沉淀雜交前體細(xì)胞,，棄上清液，使之剩余約1ml,，手指輕彈管底或手搖離心管使兩種細(xì)胞混勻并重新懸浮,，在離心管中加入1ml PEG1450 溶液(50%,無菌)，置于37℃水浴 2min,，加入5ml提前 37℃預(yù)熱的含10%胎牛血清的 MEM 培養(yǎng)液，使 PEG1450稀釋并停止作用,，1000g 離心 5min,，棄上清液，加入5mlMEM 培養(yǎng)液以稀釋 PEG1450溶液,，吸干凈稀釋的 PEG1450 溶液,。用 5ml無血清 MEM 培養(yǎng)液，手搖離心管重懸細(xì)胞(不要破壞細(xì)胞),，1000g離心5min,， 棄上清液，重復(fù) 1 次該步驟,，加入含有20%的胎牛血清的 HAT 選擇培養(yǎng)基,，混勻，將細(xì)胞懸液用培養(yǎng)液稀釋至5×104/ml,，接種于96孔板（每孔 0.1ml）或其他器皿中,，37℃ 5%CO2 孵育過夜24~48h 后選出融合細(xì)胞。

注意事項(xiàng)：

1,、應(yīng)注意無菌操作,，避免被微生物污染。

2,、PEG1450溶液較為粘稠時,，可37~60℃水浴使其變成溶液。

3,、體外培養(yǎng)的單層貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞均可做融合,，但成功概率較大的是單層貼壁細(xì)胞,。

 有效期：6 個月有效。