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廣州菲羅門科學(xué)儀器有限公司
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脫酰胺作用-蛋白質(zhì)和多肽反相HPLC分析和純化指南蛋白質(zhì)在高溫或高pH值下會(huì)降解,。在脅迫條件下，有可能發(fā)生的化學(xué)降解是酰胺側(cè)鏈上的天冬酰胺轉(zhuǎn)變?yōu)樘於彼峄虍愄於彼幔▓D37)。天冬酰胺脫去酰氨基時(shí),，許多蛋白都會(huì)失去生物活性,，但也有部分蛋白的生物活性不受影響。即使脫酰胺作用不造成生物活性的減弱,，脫酰胺作用也是蛋白接觸不利條件的指示,。特定天冬酰胺殘基脫酰胺的可能性取決于其在蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)中的位置。只有那些與溶劑接觸表面接近的天冬酰胺殘基才會(huì)發(fā)生脫酰胺作用,。相鄰的氨基酸殘基同樣影響脫酰胺作用的可能性。
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迷你電泳儀采用內(nèi)置直流電源,，可直接使用AC100~110V或AC200~240V(隨機(jī)配備電源變壓器),。蓋子和移膠板均為PC塑料，耐腐蝕,，強(qiáng)度高,；鉑金電極，使用壽命長(zhǎng),。整個(gè)儀器體積小,、重量輕，攜帶方便，操作簡(jiǎn)便,。迷你電泳儀廣泛應(yīng)用于生化領(lǐng)域,，適合教學(xué)、科研,、食品,、醫(yī)療等行業(yè)。水平電泳主要用來進(jìn)行核酸的分離和檢測(cè),，是分子生物學(xué)研究中常用的實(shí)驗(yàn)方法之一,。迷你電泳儀的電源裝置設(shè)計(jì)*――直接插插入電泳槽，無需連線,。安全的蓋子設(shè)計(jì)在電源的傍邊,。當(dāng)蓋子打開時(shí)，會(huì)自動(dòng)切斷電源,，因?yàn)殡娫床糠钟泄饷粼?。迷你電?/div>蛋白質(zhì)氧化-蛋白質(zhì)和多肽反相HPLC分析和純化指南在氧化環(huán)境條件下，盡管蛋白質(zhì)的幾個(gè)氨基酸都可能受影響,，但有可能被氧化的氨基酸是甲硫氨酸；甲硫氨酸可被氧化成甲硫氨酸亞砜（圖34）,。對(duì)甲硫氨酸殘基的氧化取決于其在蛋白質(zhì)中的位置,。埋藏在蛋白質(zhì)內(nèi)部的甲硫氨酸不可能被氧化。接近表面且與溶劑接觸的甲硫氨酸側(cè)鏈有可能被氧化,。氧化條件包括熱,、過渡金屬的存在以及溶液中氧氣的存在。同脫酰胺作用一樣,，甲硫氨酸的氧化可能導(dǎo)致生物活性的喪失或減弱,，或者，在一些情況下對(duì)生物活性無影響,。這取決于甲硫氨酸在蛋白質(zhì)中的位置,。但肽圖分析法-蛋白質(zhì)和多肽反相HPLC分析和純化指南反相液相色譜已成為蛋白質(zhì)分析和表征的標(biāo)準(zhǔn)方法，尤其是治療性藥物的分析和表征,。反相色譜分析法分辨率高,，檢測(cè)靈敏度好，能夠提供大量關(guān)于蛋白質(zhì)的信息,。有些時(shí)候,，蛋白質(zhì)作為完整的分子分析，但更多的時(shí)候采用蛋白水解酶作用于特殊的氨基酸殘基將碳骨架斷開,，從而將蛋白質(zhì)裂解成小片段,。隨后用反相液相色譜法對(duì)裂解產(chǎn)生的肽段進(jìn)行分析。該技術(shù)叫作肽圖分析，是一種標(biāo)準(zhǔn)的蛋白質(zhì)分析方法,。通過反相色譜分析蛋白質(zhì)裂解后的肽段能夠獲得蛋白質(zhì)的大量信息,。通過比較表達(dá)蛋白與參照標(biāo)準(zhǔn)蛋反相液相色譜和質(zhì)譜（MS）的聯(lián)用為蛋白質(zhì)/多肽分析提供了強(qiáng)大的工具。20世紀(jì)80年代,，約翰·貝內(nèi)特·芬恩和他的同事們開發(fā)了電噴霧離子源,，使質(zhì)譜與反相液相色譜得以聯(lián)用。采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用的好處包括：質(zhì)譜是非常靈敏的檢測(cè)技術(shù),。質(zhì)譜可以提供所分離多肽/蛋白質(zhì)的分子量,。質(zhì)譜可利用分子量特異性檢測(cè)蛋白質(zhì)。片段信息有助于確認(rèn)多肽,。質(zhì)譜基于電荷和質(zhì)量進(jìn)行分離和測(cè)定,，因此，與基于疏水性分離的反相色譜“正交”,。液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用廣泛用于肽圖的分析,，提供了一種正交檢測(cè)肽法（參考文獻(xiàn)15）。如圖26所示,，總離子質(zhì)蛋白質(zhì)/多肽液相分析中的流動(dòng)相選擇有機(jī)溶劑可將吸附在疏水界面的蛋白質(zhì)洗脫（圖14）,。在梯度洗脫期間，當(dāng)有機(jī)溶劑量達(dá)到針對(duì)每一蛋白質(zhì)的特定濃度時(shí),，蛋白質(zhì)就會(huì)從疏水界面上解吸,，繼續(xù)順著柱向下，從而從柱中洗脫,。圖14.當(dāng)有機(jī)改性劑的濃度達(dá)到特定值時(shí),，蛋白質(zhì)從疏水界面洗脫。乙腈,。在多肽的反相色譜分離時(shí)常用的有機(jī)溶劑為乙腈,。為什么選擇乙腈？乙腈易揮發(fā),，易從樣品中去除,。乙腈黏度低，柱壓低,。乙腈的紫外吸收截止波長(zhǎng)較短,。乙腈長(zhǎng)期用于分離應(yīng)用。異丙醇,。異丙醇在多肽的色譜分離中具有重要作用,。盡管異丙醇黏度大（會(huì)增大蛋白質(zhì)/多肽液相分析中的流動(dòng)相選擇有機(jī)溶劑可將吸附在疏水界面的蛋白質(zhì)洗脫（圖14）。在梯度洗脫期間,，當(dāng)有機(jī)溶劑量達(dá)到針對(duì)每一蛋白質(zhì)的特定濃度時(shí),，蛋白質(zhì)就會(huì)從疏水界面上解吸,，繼續(xù)順著柱向下，從而從柱中洗脫,。圖14.當(dāng)有機(jī)改性劑的濃度達(dá)到特定值時(shí),，蛋白質(zhì)從疏水界面洗脫。乙腈,。在多肽的反相色譜分離時(shí)常用的有機(jī)溶劑為乙腈,。為什么選擇乙腈？乙腈易揮發(fā),，易從樣品中去除,。乙腈黏度低，柱壓低,。乙腈的紫外吸收截止波長(zhǎng)較短,。乙腈長(zhǎng)期用于分離應(yīng)用。異丙醇,。異丙醇在多肽的色譜分離中具有重要作用,。盡管異丙醇黏度大（會(huì)增大選擇合適的色譜柱微粒。通過與柱內(nèi)填充微粒疏水表面的相互作用實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)與多肽的分離,。柱內(nèi)填充粒通常以硅膠為基礎(chǔ),，這是因?yàn)楣枘z的穩(wěn)定性高，能夠在大多數(shù)溶劑條件下（除了pH大于6.5的情況）保持穩(wěn)定,，此外,，硅膠可以形成各種大小的具有不同直徑的多孔球形顆粒。硅膠純度,。液相色譜柱所用硅膠填料的純度對(duì)分離性能至關(guān)重要。金屬離子雜質(zhì)會(huì)導(dǎo)致峰拖尾和分辨率下降,，如圖7A所示（0.01%和0.005%的TFA）,。含金屬離子雜質(zhì)（圖7A）的硅膠需要采用高濃度離子對(duì)試劑（如三氟yi酸（TFA））維持良好的峰形。圖7.硅
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