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產(chǎn)品介紹：
尿嘧啶DNA糖苷酶（UNG）來源于大腸桿菌重組克隆表達(dá),，分子量為25kDa,，可催化含尿嘧啶的單鏈和雙鏈DNA釋放游離尿嘧啶,。UNG酶對RNA無活性，主要應(yīng)用于PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的防污染,。其作用原理基于：如果在PCR反應(yīng)中以dUTP替代dTTP摻入DNA中,，形成了含dU堿基的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物,，該酶能選擇性斷裂單鏈和雙鏈DNA中U堿基的糖苷鍵,，降解該P(yáng)CR擴(kuò)增產(chǎn)物。

規(guī)格：1U/μl

儲存緩沖液：
20mM Tris-HCl(pH8.0，25℃),，150mM NaCl,，1mM EDTA，1mM DTT,，0.05% Tween20，50%glycerol.

試劑組成：

10×Reaction Buffer：200mM Tris-HCl(pH8.0,，25℃),，100mM NaCl，10mM EDTA,，1mg/ml BSA.

活性定義：
37℃條件下，1小時降解1μg含dU堿基的單鏈DNA的酶量為1單位,。

保存條件：
每天或每周使用保存于-20℃,。長期儲存應(yīng)保存于-70℃保存，并嚴(yán)格避免-70℃保存時反復(fù)凍融,。

質(zhì)量控制：

1,、SDS-PAGE電泳純度大于98%；

2,、1U UNG在 37℃處理3分鐘后,，103拷貝以下含U模版應(yīng)*降解，不能產(chǎn)生擴(kuò)增產(chǎn)物,。

3,、無核酸外切酶和核酸內(nèi)切酶活性、RNase酶活性,；

（1）SDS-PAGE 銀染純度大于98%

（2）UNG 酶消化能力試驗(yàn)

    以700bp含dUTP的不同拷貝數(shù)基因片段為模板,，分別加入含0.5U UNG酶的50μl PCR反應(yīng)體系，50℃ 消化2min,，94℃ 滅活4min后進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng),。

A. Biori UNG

B. Promega UNG

Lane 1：Negative control （no template）；

Lane 2：positive control（no UNG）,；

Lane 3~lane 10: 103 to 1010 copies of template 

結(jié)果表明,，我們的UNG酶與Promega UNG酶消化效果相當(dāng)，均可以有效控制108拷貝以下含有U-DNA的模板的污染,。

（3）UNG酶穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

將UNG酶置于37℃進(jìn)行7天加速試驗(yàn)。以含dUTP的（106,、107,、108,、109 copies/ml）基因?yàn)槟０澹捎煤?/span>dUTP的體系進(jìn)行PCR擴(kuò)增，50μl反應(yīng)體系加入0.5U UNG酶,，于50℃消化2min，94℃滅活4min,；然后進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng),。以Promega公司UNG酶為對照，考察UNG酶對模板的消化效果,。

1：negative（No template）,； 

2～9：postive （104、105,、106,、107、108,、109,、1010、1011 copies /ml,， No UNG）,；

10～14：control Promega UNG（106、107,、108,、109、1010 copies /ml）,；

15～19：Sample UNG（106,、107、108,、109,、1010 copies/ml）,。

1～4：Sample UNG（106、107,、108,、109 copies/ml）；

5～8：Control Promega UNG（106,、107,、108、109 copies/ml）,； 

9：negative （No template）,；

10～13：Postive （106、107,、108、109 copies/ml,，No UNG）,。

結(jié)果表明，我們的UNG酶與Promega UNG酶穩(wěn)定性相當(dāng),，均可以在37℃加速7天,，仍保持對107copies/ml含dUTP模板的消除能力。

反應(yīng)條件：

1、Incubate the product for 2 min at 50℃,；

2,、Inactivate UNG by heating to 95℃ for 5 min.

注意事項：
1、避免多次凍融,，切勿暴露在溫度波動較大之處,。溫度波動對產(chǎn)品的穩(wěn)定性有極大影響。

2,、尿嘧啶DNA糖基酶可以在PCR反應(yīng)前清除不慎污染的U-DNA分子,。為有效防止污染，一個實(shí)驗(yàn)室必須在所有的PCR反應(yīng)中均使用dUTP作為dNTPs組分之一進(jìn)行擴(kuò)增,，使所有擴(kuò)增產(chǎn)物都成為U-DNA,。

3、由于不同基因堿基組成不同,，因此有些基因?qū)?/span>UNG酶殘留活性十分敏感,，如發(fā)現(xiàn)使用UNG 酶影響擴(kuò)增靈敏度，可以嘗試降低UNG酶的用量或?qū)Ψ磻?yīng)體系中dTTP與dUTP的比例進(jìn)行調(diào)整,。推薦使用我公司生產(chǎn)的TS-UNG,，該酶滅活更加*，可以大大簡化上述試驗(yàn)過程。