目錄:北京索萊寶科技有限公司>>酶>>酶>> E010100 TS-UNG 溫度敏感型UNG酶
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更新時(shí)間:2024-08-23 11:35:52瀏覽次數(shù):2067評(píng)價(jià)
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產(chǎn)品介紹:
TS-UNG酶基因來源于低溫微生物,經(jīng)大腸桿菌重組表達(dá)獲得的新型溫度敏感型UNG酶,。該酶與常規(guī)UNG酶相同,,能夠催化含尿嘧啶的單鏈和雙鏈DNA釋放游離尿嘧啶,對(duì)RNA無(wú)活性,,主要應(yīng)用于PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的防污染,。TS-UNG酶與常規(guī)UNG酶相比,對(duì)溫度敏感,、易于滅活,,從而避免了常規(guī)UNG酶滅活后殘留活性對(duì)熒光PCR靈敏度及擴(kuò)增產(chǎn)物的降解作用。
TS-UNG酶可以在25℃~50℃范圍內(nèi)使用,,在37℃左右具有大反應(yīng)活性,。建議在37℃,10min消化含dUTP模板,,在50℃,,10min或95℃,2min進(jìn)行滅活,。利用TS-UNG酶低溫消化,、低溫滅活的特性,TS-UNG酶可以用于RT-PCR防止擴(kuò)增污染,。
活性定義:
37℃條件下,,1小時(shí)降解1μg含dU堿基的單鏈DNA的酶量為1單位。
規(guī)格:1U/μl
儲(chǔ)存緩沖液:
20 mM Tris-HCl,,pH 7.5(25℃),,100 mM NaCl,,0.1 mM EDTA,1 mM DTT,,0.1% Triton X-100,,50% glycerol.
保存條件:
保存于-20℃。并避免保存時(shí)反復(fù)凍融,。
反應(yīng)條件:
1,、反應(yīng)體系:
Component | Volume per Reaction(μl) | Concentration in Master Mix |
Template | * | < 1μg/reaction |
Primer 1 | 1~5 | 0.2~1.0μM |
Primer 2 | 1~5 | 0.2~1.0μM |
d NTPs (replace dTTP for 200μM~600μM dUTP) | 1 | 200μM(dATP、dGTP,、dCTP) |
10×PCR Buffer | 5 | 1× |
25mM MgCl2 | 2~8 | 1.0~4.0mM |
Taq(5U/μl) | 0.25 | 1.25U |
TS-UNG(1U/μl) | 0.2~0.5 | 0.2~0.5U |
H2O | * | —— |
Total volume | 50μl |
2,、Incubate the product for 10min at 37℃;
3,、Inactivate TS-UNG by heating to 50℃ for 10min,or 95℃ for 2min,;
質(zhì)量控制:
1,、SDS-PAGE電泳純度大于98%;
2,、無(wú)核酸外切酶和核酸內(nèi)切酶活性,、RNase酶活性;
注意事項(xiàng):
1,、由于不同目的基因堿基組成不同,,因此對(duì)TS-UNG酶的敏感度也不同,建議根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果,,在0.2~0.5U之間選擇TS-UNG適合用量,。
2、避免多次凍融,,切勿暴露在溫度波動(dòng)較大之處,。溫度波動(dòng)對(duì)產(chǎn)品的穩(wěn)定性有極大影響。3,、TS-UNG酶可以在PCR反應(yīng)前清除不慎污染的U-DNA分子,。為有效防止污染,一個(gè)實(shí)驗(yàn)室必須在所有的PCR反應(yīng)中均使用dUTP作為dNTPs組分之一進(jìn)行擴(kuò)增,,使所有擴(kuò)增產(chǎn)物都成為U-DNA,。
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