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脯氨酸(PRO)含量檢測試劑盒（微量法）說明書

貨號:BC0255

規(guī)格: 100T/96S

脯氨酸(PRO)含量檢測試劑盒（微量法）?產(chǎn)品簡介：

HYP是機體膠原蛋白主要成分之一，膠原蛋白大多分布于皮膚,、腱,、軟骨和血管等，因此HYP含量是反映膠原組織代謝及纖維化程度的一項重要指標,。

樣品經(jīng)水解產(chǎn)生游離的HYP,，進一補被氯胺T氧化，氧化產(chǎn)物與對二甲氨基苯甲醛反應,，產(chǎn)生紅色化合物,，在560nm處有特征吸收峰。通過測定樣品水解液560nm吸光值,，可計算HYP含量,。

產(chǎn)品內(nèi)容：

組織提取液：6mol/L鹽酸，自備,。濃鹽酸：H2O（V/V）= 1:1,，室溫保存； 

細胞提取液：液體100mL×1 瓶,，4 ℃保存,；  

試劑一：液體10mL×1 瓶，4 ℃避光保存,；  

試劑二：液體10mL×1 瓶,，4 ℃避光保存。

脯氨酸(PRO)含量檢測試劑盒（微量法）操作步驟：

一,、羥脯氨酸提?。? 

1. 組織：取約0.2g 樣品于玻璃管，加入2mL的組提取液,，置于110℃烘箱,，水解612小時，16000rpm,，25℃,，離心20min，用提取液定容2mL,，取上清待測,。  

2.  細胞：取約500 萬個細胞，加入1mL 的細胞提取液,，于高壓消毒器中15 磅保持30min,，自然降壓后待測。

二、測定操作：

羥脯氨酸含量計算：

用微量比色皿測定的計算公式:

標準曲線：y=64.875x+ 0.0251,，R²=0.9991  

（1）按組織計算  

HYP含量（mg/g） =（A₅₆₀-0.0251）÷64.875×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)  

                         =0.154×（A₅₆₀-0.0251）÷W  

（3）按細胞計算：

HYP含量（mg/10⁴cell)= （A₅₆₀-0.0251）÷64.875×V 反總÷V 樣×V 樣總÷細胞數(shù)量（萬個）

=0.077×（A₅₆₀-0.0251）÷細胞數(shù)量（萬個）

V反總：反應體系總體積,，0.3mL； V樣：反應中樣本體積,，0.06mL,；V樣總：加入提取液體積，mL,； W：樣本質(zhì)量,，g。

用96孔板測定的計算公式如下:

標準曲線：y=32.4375x+ 0.0251,，R²=0.9991  

（1）按組織計算  

HYP含量（mg/g） =（A₅₆₀-0.0251）÷32.4375×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)  

                         =0.308×（A₅₆₀-0.0251）÷W  

（3）按細胞計算：

HYP含量（mg/10⁴cell)= （A₅₆₀-0.0251）÷32.4375×V 反總÷V 樣×V 樣總÷細胞數(shù)量（萬個）

=0.154×（A₅₆₀-0.0251）÷細胞數(shù)量（萬個）  

V反總：反應體系總體積,，0.3mL； V樣：反應中樣本體積,，0.06mL,；V樣總：加入提取液體積，mL,； W：樣本質(zhì)量,，g,。

注意事項：

1,、OD值大于0.8，樣品適當稀釋再測定,，注意計算公式里乘以稀釋倍數(shù),。

2、試劑有一定的毒性,，請操作時做好防護措施,，防止吸入或與皮膚接觸。