關鍵詞:原位分子雜交服務|實驗技術服務
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原位分子雜交服務|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系,。
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測序實驗流程：
與傳統(tǒng)的放射性標記原位雜交相比，熒光原位雜交具有快速,、檢測信號強,、雜交特異性高和可以多重染色等特點，因此在分子細胞遺傳學領域受到普遍關注,。
實驗方法及步驟
1.  探針變性
將探針在75℃恒溫水浴中溫育5 min,，立即置0℃，5～10 min,，使雙鏈DNA探針變性,。
2.  標本變性
（1）將制備好的染色體玻片標本于50℃培養(yǎng)箱中烤片2～3 h,。（經Giemsa染色的標本需預先在固定液中退色后再烤片）。 
（2）取出玻片標本,，將其浸在70～75℃的體積分數70% 甲酰胺/2×SSC的變性液中變性2～3 min,。 
（3）立即按順序將標本經體積分數70%、體積分數90%和體積分數100%冰乙醇系列脫水,，每次5 min,，然后空氣干燥。
3.  雜交
將已變性或預退火的DNA探針10 μL 滴于已變性并脫水的玻片標本上,，蓋上18×18蓋玻片,，用Parafilm封片，置于潮濕暗盒中37℃雜交（約15～17 h）,。由于雜交液較少,，而且雜交溫度較高，持續(xù)時間又長,，因此為了保持標本的濕潤狀態(tài),，此過程在濕盒中進行。
4.  洗脫
此步驟有助于除去非特異性結合的探針,，從而降低本底。
（1） 雜交次日,，將標本從37℃溫箱中取出,，用刀片輕輕將蓋玻片揭掉。 
（2） 將已雜交的玻片標本放置于已預熱42～50℃的體積分數50%甲酰胺/2×SSC中洗滌3次,，每次5 min,。 
（3） 在已預熱42～50℃的1×SSC中洗滌3次，每次5 min,。 
（4） 在室溫下,，將玻片標本于2×SSC中輕洗一下。 
（5） 取出玻片,，自然干燥,。 
（6） 取200 μL復染溶液（PI/antifade或DAPI/antifade染液）滴加在玻片標本上，蓋上蓋玻片,。
5.  雜交信號的放大（適用于使用生物素標記的探針）
（1） 在玻片的雜交部位加150 μL封閉液I,，用保鮮膜覆蓋，37℃溫育20min,。 
（2） 去掉保鮮膜,，再加150 μL avidin-FITC于標本上，用保鮮膜覆蓋,，37℃繼續(xù)溫育40 min,。 
（3） 取出標本,，將其放入已預熱42～50℃的洗脫液中洗滌3次，每次5 min,。 
（4） 在玻片標本的雜交部位加150 μL封閉液II,，覆蓋保鮮膜，37℃溫育20 min,。
（5） 去掉保鮮膜,，加150 μL antiavidin于標本上，覆蓋新的保鮮膜,，37℃溫育40 min,。 
（6） 取出標本，將其放入已預熱42～50℃的新洗脫液中,，洗滌3次,，每次5 min。 
（7） 重復步驟（1）,、（2）,、（3），再于2×SSC中室溫清洗一下,。 
（8） 取出玻片,，自然干燥。 
（9） 取200 μL PI/antifade染液滴加在玻片標本上,，蓋上蓋玻片,。