關鍵詞:原位分子雜交技術服務|實驗技術服務
簡介：世界*品牌原位分子雜交技術服務|實驗技術服務原裝,，質量保證,*。
原位分子雜交技術服務|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系,。
我們具備豐富的蛋白表達設計經(jīng)驗及實驗操作技巧,，承諾客戶不成功不收費。我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信,，我們提供原始的表達菌株和克隆質粒,，客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復我們的實驗結果。
產(chǎn)品品牌：   http://www.,。,。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序實驗流程：
與傳統(tǒng)的放射性標記原位雜交相比，熒光原位雜交具有快速,、檢測信號強,、雜交特異性高和可以多重染色等特點，因此在分子細胞遺傳學領域受到普遍關注,。
實驗方法及步驟
1.  探針變性
將探針在75℃恒溫水浴中溫育5 min,，立即置0℃，5～10 min,，使雙鏈DNA探針變性,。
2.  標本變性
（1）將制備好的染色體玻片標本于50℃培養(yǎng)箱中烤片2～3 h。（經(jīng)Giemsa染色的標本需預先在固定液中退色后再烤片）,。 
（2）取出玻片標本,，將其浸在70～75℃的體積分數(shù)70% 甲酰胺/2×SSC的變性液中變性2～3 min。 
（3）立即按順序將標本經(jīng)體積分數(shù)70%,、體積分數(shù)90%和體積分數(shù)100%冰乙醇系列脫水,，每次5 min，然后空氣干燥,。
3.  雜交
將已變性或預退火的DNA探針10 μL 滴于已變性并脫水的玻片標本上,，蓋上18×18蓋玻片，用Parafilm封片,，置于潮濕暗盒中37℃雜交（約15～17 h）,。由于雜交液較少，而且雜交溫度較高,，持續(xù)時間又長,，因此為了保持標本的濕潤狀態(tài)，此過程在濕盒中進行,。
4.  洗脫
此步驟有助于除去非特異性結合的探針,，從而降低本底。
（1） 雜交次日,，將標本從37℃溫箱中取出,，用刀片輕輕將蓋玻片揭掉,。 
（2） 將已雜交的玻片標本放置于已預熱42～50℃的體積分數(shù)50%甲酰胺/2×SSC中洗滌3次，每次5 min,。 
（3） 在已預熱42～50℃的1×SSC中洗滌3次,，每次5 min。 
（4） 在室溫下,，將玻片標本于2×SSC中輕洗一下,。 
（5） 取出玻片，自然干燥,。 
（6） 取200 μL復染溶液（PI/antifade或DAPI/antifade染液）滴加在玻片標本上,，蓋上蓋玻片。
5.  雜交信號的放大（適用于使用生物素標記的探針）
（1） 在玻片的雜交部位加150 μL封閉液I,，用保鮮膜覆蓋,，37℃溫育20min。 
（2） 去掉保鮮膜,，再加150 μL avidin-FITC于標本上,，用保鮮膜覆蓋，37℃繼續(xù)溫育40 min,。 
（3） 取出標本,，將其放入已預熱42～50℃的洗脫液中洗滌3次，每次5 min,。 
（4） 在玻片標本的雜交部位加150 μL封閉液II,，覆蓋保鮮膜，37℃溫育20 min,。
（5） 去掉保鮮膜,，加150 μL antiavidin于標本上，覆蓋新的保鮮膜,，37℃溫育40 min,。 
（6） 取出標本，將其放入已預熱42～50℃的新洗脫液中,，洗滌3次,，每次5 min。 
（7） 重復步驟（1）,、（2）,、（3），再于2×SSC中室溫清洗一下,。 
（8） 取出玻片,，自然干燥。 
（9） 取200 μL PI/antifade染液滴加在玻片標本上，蓋上蓋玻片,。
雜交：
     1）準備探針,；
     2）取一個較大的濕盒，交叉放置切片,；
     3）滴10μl探針在切片的組織上,，加蓋玻片；
     4）蓋上濕盒蓋,，37℃孵育12h～16h。
     雜交后的水洗：
     5）鑷子小心去除蓋玻片,；
     6）43℃預熱雜交后水洗溶液40ml水洗切片15min,；
     7）2×SSC(37℃)洗兩次，每次10min,；
     8）切片放人染色缸的1×PBS內待檢測,，勿使切片干燥。
     檢測：
     9）從1×PBS中取出切片,，除去過多的水分,，避免標本干燥。把切片放入濕盒內,，同時處理4張切片,。
     10）每張切片使用30μl～60μl羅丹明抗或FITC卵白素，室溫下孵育20min,；
     11）去掉塑料蓋膜,，把切片放入含1×PBS的染色缸。1×PBS室溫下洗3次,，每次2min,。
擴增：
     12）從1×PBS中取出切片，斜置切片使液體排出,；
     13）每張切片滴30μl～60μl抗-卵白素抗體,，加塑料蓋膜，室溫孵育20min,；
     14）去掉塑料蓋膜,，把切片放人含1×PBS的染色缸。1×PBS室溫下洗3次,，每次2min,；
     15）從1×PBS中取出切片，斜置切片使液體排出,；
     16）每張切片滴30μl～60μl抗-卵白素抗體,，加塑料蓋膜，室溫孵育20min；
     17）1×PBS室溫下洗3次,，每次2min,。