關(guān)鍵詞:原位分子雜交|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)
簡(jiǎn)介：世界*品牌原位分子雜交|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)原裝，質(zhì)量保證,*,。
原位分子雜交|實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達(dá)體系,。
我們具備豐富的蛋白表達(dá)設(shè)計(jì)經(jīng)驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)操作技巧，承諾客戶(hù)不成功不收費(fèi),。我們所有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)可信,，我們提供原始的表達(dá)菌株和克隆質(zhì)粒，客戶(hù)可以依據(jù)我們的實(shí)驗(yàn)報(bào)告重復(fù)我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。
產(chǎn)品品牌：   http://www.,。。ｃｏｍ/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程：
實(shí)驗(yàn)方法及步驟
1.  探針變性
將探針在75℃恒溫水浴中溫育5 min,，立即置0℃,，5～10 min，使雙鏈DNA探針變性,。
2.  標(biāo)本變性
（1）將制備好的染色體玻片標(biāo)本于50℃培養(yǎng)箱中烤片2～3 h,。（經(jīng)Giemsa染色的標(biāo)本需預(yù)先在固定液中退色后再烤片）。 
（2）取出玻片標(biāo)本，將其浸在70～75℃的體積分?jǐn)?shù)70% 甲酰胺/2×SSC的變性液中變性2～3 min,。 
（3）立即按順序?qū)?biāo)本經(jīng)體積分?jǐn)?shù)70%,、體積分?jǐn)?shù)90%和體積分?jǐn)?shù)100%冰乙醇系列脫水，每次5 min,，然后空氣干燥,。
3.  雜交
將已變性或預(yù)退火的DNA探針10 μL 滴于已變性并脫水的玻片標(biāo)本上，蓋上18×18蓋玻片,，用Parafilm封片,，置于潮濕暗盒中37℃雜交（約15～17 h）。由于雜交液較少,，而且雜交溫度較高,，持續(xù)時(shí)間又長(zhǎng)，因此為了保持標(biāo)本的濕潤(rùn)狀態(tài),，此過(guò)程在濕盒中進(jìn)行,。
4.  洗脫
此步驟有助于除去非特異性結(jié)合的探針，從而降低本底,。
（1） 雜交次日,，將標(biāo)本從37℃溫箱中取出，用刀片輕輕將蓋玻片揭掉,。 
（2） 將已雜交的玻片標(biāo)本放置于已預(yù)熱42～50℃的體積分?jǐn)?shù)50%甲酰胺/2×SSC中洗滌3次,，每次5 min。 
（3） 在已預(yù)熱42～50℃的1×SSC中洗滌3次,，每次5 min,。 
（4） 在室溫下，將玻片標(biāo)本于2×SSC中輕洗一下,。 
（5） 取出玻片,，自然干燥。 
（6） 取200 μL復(fù)染溶液（PI/antifade或DAPI/antifade染液）滴加在玻片標(biāo)本上,，蓋上蓋玻片,。
5.  雜交信號(hào)的放大（適用于使用生物素標(biāo)記的探針）
（1） 在玻片的雜交部位加150 μL封閉液I，用保鮮膜覆蓋,，37℃溫育20min,。 
（2） 去掉保鮮膜，再加150 μL avidin-FITC于標(biāo)本上,，用保鮮膜覆蓋,，37℃繼續(xù)溫育40 min。 
（3） 取出標(biāo)本,，將其放入已預(yù)熱42～50℃的洗脫液中洗滌3次,，每次5 min。 
（4） 在玻片標(biāo)本的雜交部位加150 μL封閉液II，覆蓋保鮮膜,，37℃溫育20 min,。
（5） 去掉保鮮膜，加150 μL antiavidin于標(biāo)本上,，覆蓋新的保鮮膜,，37℃溫育40 min。 
（6） 取出標(biāo)本,，將其放入已預(yù)熱42～50℃的新洗脫液中,，洗滌3次，每次5 min,。 
（7） 重復(fù)步驟（1）,、（2）、（3）,，再于2×SSC中室溫清洗一下,。 
（8） 取出玻片,，自然干燥,。 
（9） 取200 μL PI/antifade染液滴加在玻片標(biāo)本上，蓋上蓋玻片,。