實時熒光定量PCR儀主要由控制系統(tǒng),、電源系統(tǒng),、光電系統(tǒng),、模塊部件,、熱蓋部件,、外殼部件和軟件(版本號:V1.0)組成,。該產(chǎn)品基于熒光聚合酶鏈式反應(PCR),,與配套的核酸檢測試劑共同使用,在臨床上可對來源于人體的核酸樣本(DNA/RNA)進行定量,、定性檢測和熔解曲線檢測,,包括病原體和人類基因等項目。
實時熒光定量PCR儀,,由熒光定量系統(tǒng)和計算機組成,,用來監(jiān)測循環(huán)過程的熒光。與實時設備相連的計算機收集熒光數(shù)據(jù),。數(shù)據(jù)通過開發(fā)的實時分析軟件以圖表的形式顯示,。原始數(shù)據(jù)被繪制成熒光強度相對于循環(huán)數(shù)的圖表。原始數(shù)據(jù)收集后可以開始分析,。實時設備的軟件能使收集到的數(shù)據(jù)進行正?;幚韥韽浹a背景熒光的差異。正?;罂梢栽O定域值水平,,這就是分析熒光數(shù)據(jù)的水平。
設備簡介
實時熒光定量PCR儀+實時熒光定量試劑+通用電腦+自動分析軟件,,構(gòu)成PCR-DNA/RNA實時熒光定量檢測系統(tǒng),。
優(yōu)勢
樣品到達域值水平所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)稱為Ct值(限制點的循環(huán)數(shù))。域值應設定在使指數(shù)期的擴增效率為大,,這樣可以獲得準確,,可重復性的數(shù)據(jù)。如果同時擴增的還有標有相應濃度的標準品,,線性回歸分析將產(chǎn)生一條標準曲線,,可以用來計算未知樣品的濃度。
醫(yī)療應用
⑴ 病原體檢測
目前,,采用熒光定量PCR檢測技術可以對淋球菌,、沙眼衣原體、解脲支原體,、人類乳頭瘤病毒,、單純皰疹病毒、人類免疫缺陷病毒,、肝炎病毒,、流感病毒、結(jié)核分枝桿菌,、EB病毒和巨細胞病毒等病原體進行定量測定,。與傳統(tǒng)的檢測方法相比具有靈敏度高,、取樣少、快速簡便等優(yōu)點,。
如:結(jié)核菌基因診斷的意義主要表現(xiàn)在:
a.區(qū)分TB與其它分枝桿菌,;
b.檢測TB耐藥基因;
c.提高TB的陽性檢出率,。
⑵ 產(chǎn)前診斷
到目前為止,,人們對遺傳性物質(zhì)改變引起的遺傳性疾病還無法治療,只能通過產(chǎn)前監(jiān)測,,減少病嬰出生,,以防止各類遺傳性疾病的發(fā)生,如為減少X連鎖遺傳病患兒的出生,,從孕婦的外周血中分離胎兒DNA,,用實時熒光定量PCR檢測其Y性別決定區(qū)基因是一種無創(chuàng)傷性的方法,易為孕婦所接受,。
⑶ 藥物療效考核
對乙型肝炎病毒(HBV),、丙型肝炎病毒(HCV) 定量分析顯示:病毒量與某些藥物的療效關系。HCV高水平表達,,干擾素治療作用不敏感,,而HCV低滴度,干擾素作用敏感,;在拉米夫定治療過程中,,HBV-DNA的血清含量曾有下降,隨后若再度上升或超出以前水平,,則提示病毒發(fā)生變異,。如PCR技術在HBV檢測中的應用及意義:
a.了解乙肝病毒在體內(nèi)存在的數(shù)量。
b.是否復制,。
c.是否傳染,,傳染性有多強。
d.是否有必要服藥,。
e.肝功能異常改變是否由病毒引起,。
f.判斷病人是適合用哪類抗病毒物。
g.判斷藥物治療的療效,。
⑷ 腫瘤基因檢測
盡管腫瘤發(fā)病的機理尚未清楚,,但相關基因發(fā)生突變是致癌性轉(zhuǎn)變的根本原因已被廣泛接受。癌基因的表達增加和突變,,在許多腫瘤早期就可以出現(xiàn),。實時熒光定量PCR不但能有效地檢測到基因的突變,而且可以準確檢測癌基因的表達量。目前用此方法進行過端粒酶hTERT基因,、慢性粒細胞性白血病WT1基因,、腫瘤ER基因、前列腺癌PSM基因,、腫瘤相關的病毒基因等多種基因的表達檢測,。隨著與腫瘤相關的新基因的不斷發(fā)現(xiàn),,熒光定量PCR技術將會在腫瘤的研究中發(fā)揮更大的作用,。