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常見(jiàn)細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)及原理

常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)可分為兩大類，一類是瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,，一類是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，因此一個(gè)宿主細(xì)胞中可存在多個(gè)拷貝數(shù),，產(chǎn)生高水平的表達(dá),，但通常只持續(xù)幾天，多用于啟動(dòng)子和其它調(diào)控元件的分析,。一般來(lái)說(shuō),，超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率較高，在轉(zhuǎn)染后24-72小時(shí)內(nèi)（依賴于各種不同的構(gòu)建)分析結(jié)果,，常常用到一些報(bào)告系統(tǒng)如熒光蛋白，β半乳糖苷酶等來(lái)幫助檢測(cè),。后者也稱穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,，外源DNA 既可以整合到宿主染色體中，也可能作為一種游離體（episome)存在,。盡管線性 DNA比超螺旋DNA轉(zhuǎn)入量低但整合率高,。外源DNA整合到染色體中概率很小，大約1/104轉(zhuǎn)染細(xì)胞能整合,，通常需要通過(guò)一些選擇性標(biāo)記,，如來(lái)氨丙基轉(zhuǎn)移酶

今天小編帶大家了解一下不同細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)的原理：

除上述傳統(tǒng)方法外,，近年來(lái)國(guó)際上推出了一些陽(yáng)離子聚合物基因轉(zhuǎn)染技術(shù),，以其適用宿主范圍廣，操作簡(jiǎn)便對(duì)細(xì)胞毒性小,轉(zhuǎn)染效率高受到研究者們的青睞,。其中樹(shù)枝狀聚合物(Dendrimers)和聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,，PEI)的轉(zhuǎn)染性能最佳，但樹(shù)枝狀聚合物的結(jié)構(gòu)不易于進(jìn)一步改性,，且其合成工藝復(fù)雜,。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽(yáng)離子電荷密度的有機(jī)大分子，每相隔二個(gè)碳個(gè)原子,，即每“第三個(gè)原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子,，使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在任何pH下都能充當(dāng)有效的“質(zhì)子海綿"(proton sponge)體,。這種聚陽(yáng)離子能將各種報(bào)告基因轉(zhuǎn)入各種種屬細(xì)胞，其效果好于脂質(zhì)聚酰胺,，經(jīng)進(jìn)一步的改性后,，其轉(zhuǎn)染性能好于樹(shù)枝狀聚合物，而且它的細(xì)胞毒性低,。大量實(shí)驗(yàn)證明,，PEI是非常有希望的基因治療載體。目前在設(shè)計(jì)更復(fù)雜的基因載體時(shí),，PEI經(jīng)常做為核心組成成分,。

線型.PEI(Line PEI,LPEI)與其衍生物用作基因轉(zhuǎn)染載體的研究比分枝狀PEI(Branched PEI,BPEI）要早一些，過(guò)去的研究認(rèn)為在不考慮具體條件,，LPEI/DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物的細(xì)胞毒性較低,，有利于細(xì)胞定位，因此與BPEI相比應(yīng)該轉(zhuǎn)染效率高一些,。但最近研究表明BPEI的分枝度高有利于形成小的轉(zhuǎn)染復(fù)合物,，從而提高轉(zhuǎn)染效率，但同時(shí)細(xì)胞毒性也增大,。超高分枝的,、較柔性的PEI衍生物含有額外的仲胺基和叔胺基，在染實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)這種PEI的毒性低,但轉(zhuǎn)染效率卻較高,。