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常見細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)及原理

常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)可分為兩大類，一類是瞬時轉(zhuǎn)染,，一類是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，因此一個宿主細(xì)胞中可存在多個拷貝數(shù),，產(chǎn)生高水平的表達(dá),，但通常只持續(xù)幾天，多用于啟動子和其它調(diào)控元件的分析,。一般來說,，超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率較高，在轉(zhuǎn)染后24-72小時內(nèi)（依賴于各種不同的構(gòu)建)分析結(jié)果,，常常用到一些報告系統(tǒng)如熒光蛋白,，β半乳糖苷酶等來幫助檢測。后者也稱穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,，外源DNA 既可以整合到宿主染色體中,，也可能作為一種游離體（episome)存在。盡管線性 DNA比超螺旋DNA轉(zhuǎn)入量低但整合率高,。外源DNA整合到染色體中概率很小,，大約1/104轉(zhuǎn)染細(xì)胞能整合，通常需要通過一些選擇性標(biāo)記,，如來氨丙基轉(zhuǎn)移酶

今天小編帶大家了解一下不同細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)的原理：

除上述傳統(tǒng)方法外，近年來國際上推出了一些陽離子聚合物基因轉(zhuǎn)染技術(shù),，以其適用宿主范圍廣,，操作簡便對細(xì)胞毒性小,轉(zhuǎn)染效率高受到研究者們的青睞。其中樹枝狀聚合物(Dendrimers)和聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,，PEI)的轉(zhuǎn)染性能最佳,，但樹枝狀聚合物的結(jié)構(gòu)不易于進(jìn)一步改性，且其合成工藝復(fù)雜,。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子,，每相隔二個碳個原子，即每“第三個原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子,，使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在任何pH下都能充當(dāng)有效的“質(zhì)子海綿"(proton sponge)體,。這種聚陽離子能將各種報告基因轉(zhuǎn)入各種種屬細(xì)胞，其效果好于脂質(zhì)聚酰胺,，經(jīng)進(jìn)一步的改性后,，其轉(zhuǎn)染性能好于樹枝狀聚合物，而且它的細(xì)胞毒性低。大量實驗證明,，PEI是非常有希望的基因治療載體,。目前在設(shè)計更復(fù)雜的基因載體時，PEI經(jīng)常做為核心組成成分,。

線型.PEI(Line PEI,LPEI)與其衍生物用作基因轉(zhuǎn)染載體的研究比分枝狀PEI(Branched PEI,BPEI）要早一些,，過去的研究認(rèn)為在不考慮具體條件，LPEI/DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物的細(xì)胞毒性較低,，有利于細(xì)胞定位,，因此與BPEI相比應(yīng)該轉(zhuǎn)染效率高一些。但最近研究表明BPEI的分枝度高有利于形成小的轉(zhuǎn)染復(fù)合物,，從而提高轉(zhuǎn)染效率,，但同時細(xì)胞毒性也增大。超高分枝的,、較柔性的PEI衍生物含有額外的仲胺基和叔胺基,，在染實驗中發(fā)現(xiàn)這種PEI的毒性低,但轉(zhuǎn)染效率卻較高。