產(chǎn)品名稱： Cell Counting Kit-8（CCK-8試劑盒） 細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒

保存條件：4℃避光保存一年有效,，-20℃避光保存兩年有效,。

產(chǎn)品簡介：

1.  Cell Counting Kit-8簡稱CCK-8試劑盒，是一種基于WST-8的廣泛應(yīng)用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒,。

2.  CCK-8試劑中含有WST–8：化學(xué)名：2-（2-甲氧基-4-硝基苯基）-3-（4-硝基苯基）-5-（2,4-二磺酸苯）-2H-四唑單鈉鹽],，它在電子載體的作用下被細胞線粒體中的一些脫氫酶還原生成橙黃色的formazan。細胞增殖越多越快,，則顏色越深,；細胞毒性越大，則顏色越淺。對于同樣的細胞,，顏色的深淺和細胞數(shù)目呈線性關(guān)系,。

3.  WST-8是MTT的一種升級替代產(chǎn)品，和MTT或其它MTT類似產(chǎn)品如XTT,、MTS等相比有明顯的優(yōu)點,。首先，MTT被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成的formazan不是水溶性的,，需要有特定的溶解液來溶解,；而WST-8和XTT、MTS產(chǎn)生的formazan都是水溶性的,，可以省去后續(xù)的溶解步驟,。其次，WST-8產(chǎn)生的formazan比XTT和MTS產(chǎn)生的formazan更易溶解,。再次,，WST-8比XTT和MTS更加穩(wěn)定，使實驗結(jié)果更加穩(wěn)定,。另外,，WST-8和MTT、XTT等相比線性范圍更寬,，靈敏度更高,。

4.  WST-8和WST-1相比，檢測靈敏度更高,，更易溶解,，并且更加穩(wěn)定。

5.  本試劑盒可以用于細胞因子等誘導(dǎo)的細胞增殖檢測,，也可以用于抗癌藥物等對細胞有毒試劑誘導(dǎo)的細胞毒性檢測,，或一些藥物誘導(dǎo)的細胞生長抑制檢測。

6.  本試劑盒檢測非常便捷,。試劑盒僅一管已經(jīng)配制好的含有WST-8的CCK-8溶液,，無須再進行任何配制等操作。無須使用同位素,，所有的檢測步驟僅在同一塊96孔板內(nèi)完成,。不必洗滌細胞，不必收集細胞,，也不必采用額外的步驟去溶解formazan,。可以用于大批量樣品的檢測,。

7.  酚紅和血清對本試劑盒的測定無明顯影響,。

8.  WST-8對細胞無明顯毒性,。加入WST-8顯色后，可以在不同時間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀板,，使檢測時間更加靈活,，便于找到*測定時間。

使用說明：

1.  收集對數(shù)期細胞,，調(diào)整細胞懸液濃度,，每孔加入100ul,鋪板使待測細胞調(diào)密度至1000-10000孔，（邊緣孔用無菌PBS填充）,。

2.  5%CO2，37℃孵育,，至細胞單層鋪滿孔底（96孔平底板,，具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小,，細胞增殖速度的快慢等決定）,。加入濃度梯度的藥物，原則上,，細胞貼壁后即可加藥,，或兩小時,，或半天時間,，每孔0-10ul,，設(shè)3-5個復(fù)孔.建議設(shè)5個,。

3.  每孔加入10微升CCK-8溶液,。如果起始的培養(yǎng)體積為200微升,，則需加入20微升CCK-8溶液,，其它情況以此類推,?？梢杂眉恿讼鄳?yīng)量細胞培養(yǎng)液和CCK-8溶液但沒有加入細胞的孔作為空白對照,。如果擔(dān)心所使用的藥物會干擾檢測，需設(shè)置加了相應(yīng)量細胞培養(yǎng)液,、藥物和CCK-8溶液但沒有加入細胞的孔作為空白對照,。

4.  在細胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育0.5-4小時，對于大多數(shù)情況孵育1小時就可以了,。時間的長短根據(jù)細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定,，初次實驗時可以在0.5、1,、2和4小時后分別用酶標(biāo)儀檢測,，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個時間點用于后續(xù)實驗。

5.  在450nm測定吸光度,。如無450nm濾光片,，可以使用420-480nm的濾光片,。可以使用大于600nm的波長,，例如650nm,，作為參考波長進行雙波長測定。

注意事項：

1.  由于使用96孔板進行檢測,，如果細胞培養(yǎng)時間較長,，一定要注意蒸發(fā)的問題。一方面,，由于96孔板周圍一圈zui容易蒸發(fā),，可以采取棄用周圍一圈的辦法，改加PBS,，水或培養(yǎng)液,；另一方面，可以把96孔板置于靠近培養(yǎng)箱內(nèi)水源的地方,，以緩解蒸發(fā),。

2.  本試劑盒的檢測依賴于脫氫酶催化的反應(yīng)，如果待檢測體系中存在較多的還原劑,，例如一些抗氧化劑會干擾檢測,，需設(shè)法去除。

3.  用酶標(biāo)儀檢測前需確保每個孔內(nèi)沒有氣泡,，否則會干擾測定,。

4.  使用時帶那種透明的簿膜手套。