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供貨周期	現(xiàn)貨

所有產(chǎn)品僅供科研使用,，不能用于食用和醫(yī)療等

Western Blotting檢測(cè),WB實(shí)驗(yàn)代測(cè),，western blot檢測(cè)服務(wù)

Western blot樣本要求

客戶(hù)需新鮮或正確保存的蛋白樣品，檢測(cè)目的蛋白的一抗（或由本公司代購(gòu)）,。樣品要求為：

1,、裂解樣品總蛋白量>500ug/樣品。

2,、細(xì)胞樣品總蛋白濃度>1mg/ml,。

3、組織樣品總蛋白濃度>10-15mg/ml,。

Western blot結(jié)果及數(shù)據(jù)提供

內(nèi)參蛋白和目的蛋白曝光膠片各一張,，可提供掃描圖，實(shí)驗(yàn)報(bào)告,，包括整個(gè)試驗(yàn)流程所涉及的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和實(shí)驗(yàn)步驟,。如需進(jìn)行蛋白純化服務(wù)，將提供檢測(cè)報(bào)告

western blot檢測(cè)服務(wù)

服務(wù)內(nèi)容

我們提供從蛋白制備,、蛋白電泳到Western blot檢測(cè)的全流程服務(wù),，如需要還可進(jìn)行灰度分析,。

說(shuō)明

1、建議提供目的蛋白陽(yáng)性表達(dá)樣品（純蛋白或有陽(yáng)性表達(dá)的細(xì)胞或組織）作為陽(yáng)性對(duì)照,。

2,、每張膜檢測(cè)1-8個(gè)樣品。

3,、如果一抗由客戶(hù)提供,，請(qǐng)?jiān)谡_條件下保存，避免污染及反復(fù)凍融,。

關(guān)于Western blot實(shí)驗(yàn)異常分析

『無(wú)信號(hào)』

原因	建議
一抗與二抗不匹配	選擇針對(duì)一抗來(lái)源種屬制備的二抗,；
一抗不識(shí)別目的的種屬的蛋白	1)檢查抗體的說(shuō)明書(shū)，適用范圍內(nèi)是否包含目的種屬 2)使用陽(yáng)性對(duì)照來(lái)檢查抗體質(zhì)量
一抗或二抗不足,，沒(méi)有足夠的抗體結(jié)合到目的蛋白	1)降低抗體稀釋倍數(shù),，增加抗體濃度 2)延長(zhǎng)孵育時(shí)間
封閉劑與一抗有交叉反應(yīng)	改變封閉劑
抗原不足	1)每個(gè)泳道加入20-30ug總蛋白 2)制備樣品要使用蛋白酶抑制物及使用陽(yáng)性對(duì)照
在檢測(cè)的組織內(nèi)目的蛋白表達(dá)水平低	檢測(cè)樣本不表達(dá)目的蛋白選擇表達(dá)量高的細(xì)胞作為陽(yáng)性對(duì)照，用于確定檢測(cè)樣本是否為陰性,，也可更換細(xì)胞系
蛋白轉(zhuǎn)膜效率低	1)利用麗春紅檢測(cè)轉(zhuǎn)膜效率;檢查轉(zhuǎn)移裝置是否電極弄反 2)轉(zhuǎn)移前膜是否用甲醇侵泡過(guò)
膜過(guò)渡洗滌	減少洗滌時(shí)間和強(qiáng)度
疊氮鈉抑制二抗活性	二抗稀釋液內(nèi)不用疊氮鈉

『沒(méi)有特異條帶』

原因	建議
細(xì)胞系傳代過(guò)多后蛋白表達(dá)譜發(fā)送變化	1)使用未傳代或傳代次數(shù)較少的細(xì)胞系進(jìn)行樣品制備
蛋白本身有很多修飾	1)查閱文獻(xiàn),，確定目的蛋白是否存在多種修飾
蛋白被消化或者降解	1)蛋白樣品確保未被污染，確保含有蛋白酶抑制劑
所檢測(cè)蛋白存在多種剪接體,，導(dǎo)致分子量大小不同	1)查閱文獻(xiàn)或者通過(guò)搜索數(shù)據(jù)庫(kù)來(lái)確定該蛋白是否存在多種長(zhǎng)度不同的編碼mRNA
一抗或二抗?jié)舛雀?/span>	1)減低抗體濃度
洗滌不夠	1)充分洗滌

『條帶大小不正確』

原因	建議
目的蛋白被降解	確保蛋白樣品未被污染,，確保含有蛋白酶抑制劑
存在不同的剪接體	查閱文獻(xiàn)或者通過(guò)搜索數(shù)據(jù)庫(kù)來(lái)確定該蛋白是否存在多種長(zhǎng)度不同的編碼mRNA
重組蛋白	檢測(cè)是否存在額外加入的蛋白
特殊蛋白如MDM2等	仔細(xì)閱讀抗體說(shuō)明書(shū)

尊敬的客戶(hù)：
本公司有放射免疫技術(shù)服務(wù)、蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù),、免疫組化,、PCR技術(shù)服務(wù)、生物信息學(xué)數(shù)據(jù)分析等,，如果您想了解Western blot的更多內(nèi)容或者其他服務(wù)信息,，您可以本公司的了解更多產(chǎn)品的詳細(xì)信息，至善至美的服務(wù)是我們永無(wú)止境的追求,，歡迎新老客戶(hù)放心選購(gòu)自己心儀產(chǎn)品,，我們將竭誠(chéng)為您服務(wù)！

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