人腫瘤壞死因子α(TNF-α)elisa試劑盒簡(jiǎn)介

腫瘤壞死因子（Tumor Necrosis Factor,，TNF）可分為T(mén)NF α和TNFβ兩種,，前者來(lái)自單核巨噬細(xì)胞,，后者由活化T細(xì)胞產(chǎn)生,，是具有重要生物活性的細(xì)胞因子,。存在于細(xì)胞上的TNF 受體主要有兩種TNFRⅠ和TNFRⅡ，血清中存在的是可溶性的TNFR（s TNFRⅠ, s TNFRⅡ）,。八十年代人們發(fā)現(xiàn)其在消耗癥中起了重要作用,，又稱(chēng)惡液質(zhì)素。TNF主要由活化的巨噬細(xì)胞,，NK細(xì)胞及T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生,。

人腫瘤壞死因子α(TNF-α)elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)條件選擇

在ELISA中，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的,，其中包括:

　?。?）　固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯,、聚苯乙烯,、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板,、試管,、珠粒等,。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被,，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,，據(jù)此判明其吸附性能是否良好,。

　　（2） 包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時(shí),，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間,。吸附溫度，時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18～24小時(shí),。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1,、1.0和10μg/ml等）進(jìn)行包被后，在其它試驗(yàn)條件相同時(shí),，觀察陽(yáng)性標(biāo)本的OD值,。選擇OD值z(mì)ui大而蛋白量zui少的濃度。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)通常為1～10μg/ml,。

　?。?）　酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定（見(jiàn)酶標(biāo)記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物,、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度,。

（4）　酶的底物及供氫體的選擇：對(duì)供氫體的選擇要求是價(jià)廉、安全,、有明顯地顯色反應(yīng),，而本身無(wú)色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用,，應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌,、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體,。底物作用一段時(shí)間后,，應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間,，以10-30分鐘為宜,。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入,。

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