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人組胺(HIS)elisa試劑盒簡介
組胺是自體活性物質(zhì)之一,,在體內(nèi)由組氨酸脫羧基而成,組織中的組胺是以無活性的結(jié)合型存在于肥大細胞和嗜堿性粒細胞的顆粒中,,皮膚、支氣管粘膜、腸粘膜和神經(jīng)系統(tǒng)中含量較多,。當機體受到理化刺激或發(fā)生過敏反應(yīng)時,可引起這些細胞脫顆粒,,導(dǎo)致組胺釋放,,與組胺受體結(jié)合而產(chǎn)生生物效應(yīng)??菇M胺是拮抗組胺對人體的生物效應(yīng),,即應(yīng)用抗組胺藥物??菇M胺受體就是拮抗組胺的H1和H2受體,。由于此兩種受體在人體內(nèi)分布不同而產(chǎn)生不同的效應(yīng),它是抗組胺藥應(yīng)用治療疾病的生理藥理基礎(chǔ),。
人組胺(HIS)elisa試劑盒實驗條件選擇
在ELISA中,,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,,其中包括:
(1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,,如聚氯乙烯,、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等,。其形式可以是凹孔平板,、試管、珠粒等,。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板,。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,,在同一實驗條件下進行反應(yīng),,觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好,。
?。?) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間,。吸附溫度,,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18~24小時。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1,、1.0和10μg/ml等)進行包被后,,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值,。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度,。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。
?。?) 酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份),。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度,。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉,、安全、有明顯地顯色反應(yīng),,而本身無色,。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護,。有條件者應(yīng)使用不致癌,、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體,。底物作用一段時間后,,應(yīng)加入強酸或強堿以終止反應(yīng),。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜,。底物使用液必須新鮮配制,,尤其是H2O2在臨用前加入。
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