MPO試劑基本信息

MPO試劑盒太好用啦

髓過(guò)氧化物酶（myeloperoxidase,，MPO）又稱(chēng)過(guò)氧化物酶,，是血紅素輔基的血紅素蛋白酶，是血紅素過(guò)氧化物酶超家族成員之一,。存在于髓系細(xì)胞（主要是中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞）的嗜苯胺藍(lán)顆粒中,，是髓細(xì)胞的特異性標(biāo)志，隨著對(duì)MPO研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)MPO基因多態(tài)性導(dǎo)致個(gè)體對(duì)一些疾病易感性的差異，與人類(lèi)多種疾病的發(fā)生,、發(fā)展密切相關(guān)，因此越來(lái)越受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的重視,。

髓過(guò)氧化物酶(MPO)測(cè)試盒說(shuō)明書(shū)

 MPO是中性粒細(xì)胞的功能標(biāo)志和激活標(biāo)志，其水平及活性變化代表著嗜中性多形核白細(xì)胞（PMN）的功能和活性狀態(tài)。純化的人MPO活性為25～35IU/mg,，水溶性好,，底物H2O2濃度>0.8mmol時(shí)酶受抑制,，酶反應(yīng)*pH為4.5～5.5,，當(dāng)pH≥10，或≤2時(shí)酶失活,。MPO的主要功能是在吞噬細(xì)胞內(nèi)殺滅微生物,，利用過(guò)氧化
氫和氯離子產(chǎn)生次氯酸鹽,，并形成具有氧化能力的自由基,。構(gòu)成MPO–H2O2–鹵素系統(tǒng),。unionluck研究發(fā)現(xiàn),，MPO不僅能殺滅吞噬于細(xì)胞內(nèi)的微生物，而且可釋放到細(xì)胞外,，破壞多種靶物質(zhì),，如腫瘤細(xì)胞、血小板,、NK細(xì)胞,、原蟲(chóng)、毒素等,，對(duì)機(jī)體產(chǎn)生和調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)等多方面發(fā)揮作用,。然而，在特定條件下,，MPO催化反應(yīng)生成過(guò)量的氧化劑（HOCl,、3–氯化酪氨酸、酪氨?；?、硝基酪氨酸等），超過(guò)局部抗氧化劑的防御反應(yīng)時(shí),，就會(huì)導(dǎo)致氧化應(yīng)激和氧化性組織損傷,。MPO還參與調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)的許多過(guò)程,，MPO缺陷的中性粒細(xì)胞因過(guò)量的注入炎癥部位而發(fā)生氧化反應(yīng)，大量的超氧化物和氧化物形成,，造成炎癥部位組織細(xì)胞損傷,。此外還有協(xié)和洛克的學(xué)者發(fā)現(xiàn)MPO能與DNA牢固結(jié)合形成復(fù)合物，有效保護(hù)DNA防止其在氧化過(guò)程中受損,，從而保證髓系細(xì)胞的正常分化成熟及功能,。嗜中性粒細(xì)胞是粒狀白血細(xì)胞，在寄主防衛(wèi)以及噬菌作用破壞感染性細(xì)菌的過(guò)程中起著重要作用,。教科書(shū)上關(guān)于嗜中性粒細(xì)胞功能的模型是這樣的：將毒性過(guò)氧化物釋放進(jìn)含有被攝取的微生物的小囊中,，接下來(lái)是由髓過(guò)氧化物酶催化的鹵化作用。

髓過(guò)氧化物酶(MPO)測(cè)試盒說(shuō)明書(shū)

一．試劑組成與配制：（100T/48樣）

試劑一：緩沖貯備液35ml X 1瓶,，4℃保存6個(gè)月

         緩沖應(yīng)用液的配制：  貯備液：雙蒸水=1:9,，按需要量配制，4℃保存1個(gè)月,。

試劑二： 粉劑X2支,，4℃保存6個(gè)月。臨用時(shí)每支加緩沖應(yīng)用液60ml溶解,，可以37℃加熱溶解,，4℃保存2周。

【注】若您所需測(cè)的是組織樣本,，并且除髓過(guò)氧化物酶之外,，還需測(cè)其他項(xiàng)目時(shí)，此時(shí)每支試劑二粉劑需配成濃縮一倍的溶液,，即每支試劑二粉劑加到緩沖應(yīng)用液30ml中,。

試劑三： 粉劑 X3支,，溶劑6mlX3支,，4℃保存6個(gè)月。用時(shí)1支粉劑倒入1支溶劑中溶解,，提前一天配制,，充分溶解后4℃保存2周。

試劑四：溶液24mlX1瓶,，天冷時(shí)會(huì)凝固,。用前放入37℃以上的水中搖晃使其溶解至透明后方可應(yīng)用，室溫保存6個(gè)月,。

試劑五：粉劑X2支,，4℃保存6個(gè)月。

試劑六：溶液0.5mlX1支,，4℃保存6個(gè)月,。

     顯色劑的配制：臨用時(shí)將試劑五粉劑1支加到100ml緩沖應(yīng)用液中,，充分搖勻，待粉劑*溶解后再加入試劑六0.1ml,，充分混勻,，配制好的顯色劑4℃避光保存。

試劑七：溶液6ml X1支,，4℃保存6個(gè)月,。

二．組織樣本的MPO測(cè)定

（一）、樣本前處理

       1.準(zhǔn)確稱(chēng)取組織重量,，以配制好的試劑二溶液為勻漿介質(zhì),，按重量體積比為1:19加勻漿介質(zhì)制備成5%的組織勻漿，不需要進(jìn)行離心,。

【注】：若您除做髓過(guò)氧化物酶之外,，還需要測(cè)其他指標(biāo)時(shí)，則組織勻漿制備要按下面方法：

1.試劑二配制時(shí)要濃縮一倍,，即每支試劑二粉劑加到30ml緩沖應(yīng)用液中,；

2.先用生理鹽水為勻漿介質(zhì)按實(shí)驗(yàn)方法學(xué)制成濃縮一倍的勻漿，即10%勻漿（腦組織制備成20%勻漿）,，不要離心,，取出部分濃縮一倍勻漿按1:1比例加入濃縮一倍的試劑二溶液，混勻后再進(jìn)行測(cè)定,。

2.取5%組織勻漿0.9ml加3號(hào)試劑0.1ml,，（如果組織勻漿量不夠，可以按9:1的比例減少組織勻漿及3號(hào)試劑的用量）,，充分混勻后37℃水浴15分鐘,，取出后待測(cè)。

（二）,、操作表：

混勻，60℃水浴10分鐘,，取出后立即在460nm處,，1cm光徑，雙蒸水調(diào)零,，測(cè)各管吸光度值,。

注1： 天冷時(shí)，反應(yīng)液會(huì)出現(xiàn)凝固狀態(tài),，吸光度上升,，您可以用25 - 37℃水浴箱或取一個(gè)盛25 - 37℃熱水的燒杯放在比色機(jī)旁邊，將各待測(cè)管一次放入水浴箱或燒杯中1 - 2 分鐘，待凝固消失后即可進(jìn)行比色,。

注2：混勻時(shí),，用漩渦混勻器，使液體上下充分混勻（一定要使zui下面液體也能旋轉(zhuǎn)到上面,，建議不要用尖底的管子做,，尤其不可用1.5ml的EP管，因?yàn)檫@樣非常難混勻）

（三）,、計(jì)算：

1.酶活力單位定義：每克組織濕片在37℃的反應(yīng)體系中,，H2O2被分解1umol為1個(gè)酶活力單位。

2.計(jì)算公式：MPO活力=

3.計(jì)算舉例：

例一：取5%的小鼠心肌勻漿0.2ml按上述步驟進(jìn)行檢測(cè),，測(cè)得對(duì)照管吸光度為0.030,，測(cè)定管吸光度為0.164，則計(jì)算如下：

例二：取5%的大鼠肝勻漿0.2ml按上述步驟進(jìn)行檢測(cè),，測(cè)得對(duì)照管吸光度為0.028,，測(cè)定管吸光度為0.183，則計(jì)算如下：

例三：取10%的大鼠肝勻漿0.2ml按上述步驟進(jìn)行檢測(cè),，測(cè)得對(duì)照管吸光度為0.002,，測(cè)定管吸光度為0.012，則計(jì)算如下：

【注】*11.3為斜率的倒數(shù)

      ** 取樣中所含組織濕片的量（克）

     *** 0.05為5%的組織勻漿,，即5克組織/100ml組織勻漿,。

**** 0.2為取樣量0.2ml。

• 血清（漿）樣本中MPO測(cè)定

（一）,、血清（漿）樣本前處理：

   1,、 取血清（漿）與試劑二按1:1比例稀釋?zhuān)浞只靹颉?/span>

  2.取上面的混合液0.9ml加3號(hào)試劑0.1ml，（如果混合液量不夠,，可以按9:1的比例減少混合液及3號(hào)試劑的用量）,，充分混勻后37℃水浴15分鐘。

（二）,、操作表：

混勻,，60℃水浴10分鐘,，取出后立即在460nm處，1cm光徑,，雙蒸水調(diào)零,，測(cè)各管吸光度值,。

注1:天冷時(shí),，反應(yīng)液會(huì)出現(xiàn)凝固狀態(tài)，吸光度上升,，您可以用25~37℃的水浴箱或取一根盛25~37℃熱水的燒杯放在比色機(jī)旁邊,，將各代測(cè)管一次放入水浴箱或燒杯中1~2分鐘,，待凝固消失后即可進(jìn)行比色,。

注2：混勻時(shí),，用漩渦混勻器，是液體上下充分混勻（一定要使zui下面液體也能旋轉(zhuǎn)到上面,，建議不要用尖底的管子做,，尤其不可用1.5ml的EP管，因?yàn)檫@樣非常難混勻）

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（三）,、計(jì)算：

1,、酶活力單位定義：每升血清（漿）在37℃的反應(yīng)體系中H2O2被分解1umol為1個(gè)酶活力單位。

2,、計(jì)算公式：

3、計(jì)算舉例：

        取0.45ml的血清加0.45ml的試劑二充分混勻,，再加0.1ml的試劑三，再充分混勻,，37℃水浴15分鐘后，取0.2ml做檢測(cè),，測(cè)得測(cè)定管OD值0.053,，對(duì)照OD值0.013，則計(jì)算如下：

注：*     11.3為斜率的倒數(shù)

    **    取樣中所含血清的量（升）

    ***   0.45為血清的量

    ****  0.2為取樣量0.2ml

四,、測(cè)定原理：

        中性白細(xì)胞中存在有髓過(guò)氧化物酶 ,，每個(gè)細(xì)胞中所含的酶的量是一定的，約占細(xì)胞干重的5%,，該酶具有使過(guò)氧化氫還原的能力，利用這一特點(diǎn)可以分析酶的活力,，并定量測(cè)定中性白細(xì)胞的數(shù)目,。其原理如下：

MPO+H2O2→復(fù)合物,；復(fù)合物+AH2(供氫體) →H2O+MPO+A產(chǎn)物

通過(guò)供氫體鄰連茴香胺供氫后生物試劑黃色化合物,，在460nm處通過(guò)比色測(cè)定A產(chǎn)物的生成量,，從而推算出MPO的活力以及H2O2減少的量和白細(xì)胞的數(shù)目,。

信帆生物具有多年試劑領(lǐng)域的研發(fā)、生物試劑和銷(xiāo)售經(jīng)驗(yàn),，目前已經(jīng)成長(zhǎng)為國(guó)內(nèi)規(guī)模較大的試劑研發(fā),、生物試劑和銷(xiāo)售的綜合性企業(yè),。我們供應(yīng)的專(zhuān)業(yè)科研生化試劑,，品種多，純度高,，質(zhì)量保證,。如果您想了解該產(chǎn)品的詳細(xì)資料,，歡迎！

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