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考馬斯亮蘭G250與蛋白質(zhì)結(jié)合,在0-1000ug/ml范圍內(nèi),,于波長(zhǎng)595nm處的吸光度與蛋白質(zhì)含量成正比,可用于蛋白質(zhì)含量的測(cè)定??捡R斯亮蘭G250與蛋白質(zhì)結(jié)合迅速,結(jié)合產(chǎn)物在室溫下10分鐘內(nèi)較為穩(wěn)定,,是一種較好的蛋白質(zhì)定量測(cè)定方法,。
1. 實(shí)驗(yàn)部分
1.1 儀器與試劑:
Labtech UV POWER紫外分光光度計(jì);玻璃比色皿一套,;考馬斯亮藍(lán)G250,;
牛血清蛋白;超純水,。
1.2 試液的制備:
牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000ug/ml)的制備 稱取100mg牛血清蛋白置100ml容量瓶中,,加入超純水溶解并定容。
考馬斯亮蘭G250試劑 稱取100mg考馬斯亮蘭G250,,溶于50ml95%的乙醇后,,加入120ml85%的磷酸,用水稀釋至1升,。
2. 結(jié)果與討論
2.1 校正曲線的繪制
準(zhǔn)確吸取1000ug/ml牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0,、0.02、0.04,、0.06,、0.08、0.1ml分別加入到6只10ml試管中,,然后用超純水補(bǔ)充到0.1ml,,各試管分別加入5ml考馬斯亮蘭G250試劑,混合均勻后,,即可依次在595nm處測(cè)定吸光度,。以濃度
為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo)繪制校正曲線如下圖,,校正曲線方程為A=0.613556C+0.001008,,R=0.9994。
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