（一）,、儀器設(shè)備

1）18cm不銹鋼高壓鍋或電爐或醫(yī)用微波爐；
2）水浴鍋

（二）,、試劑

1）pbs緩沖液（pH7.2～7.4）：NaCl 137mmol/L,，KCl 2.7mmol/L,，Na2HPO4 4.3mmol/L， KH2PO4 1.4mmol/L,。
2）0.01mol/L檸檬酸鹽緩沖液（CB,，pH6.0，1000ml）：檸檬酸三鈉 3g,，檸檬酸 0.4g,。
3）0.5mol/L EDTA緩沖液（pH8.0）：700ml水中溶解186.1gEDTA·2H2O，用10 mmol/L NaOH調(diào)至pH8.0,加水至1000ml,。
4）1mol/L的TBS緩沖液（pH8.0）：在800ml水中溶
解121gTris堿,，用1N的HCl調(diào)至pH8.0,加水至1000ml。
5）酶消化液： a,、0.1%胰蛋白酶液：用0.1%CaCl2(pH7.8) 配制,。 b、0.4%胃蛋白酶液：用0.1N的HCl配制,。
6）3%甲醇-H2O2溶液：用30%H2O2和80%甲醇溶液配制。
7）封裱劑：
a,、甘油和0.5mmol/L碳酸鹽緩沖液（pH9.0～9.5）等量混合,；
b、油和TBS(或PBS)配制,。
8）TBS/PBS pH9.0～9.5,，適用于熒光顯微鏡標(biāo)本；pH7.0～7.4適合于光學(xué)顯微鏡標(biāo)本,。

（三）,、操作流程

1、脫蠟和水化
脫蠟前,，應(yīng)將組織芯片在室溫中放置60分鐘或60℃恒溫箱中烘烤20分鐘,。
1）組織芯片置于二甲苯中浸泡10分鐘，更換二甲苯后再浸泡10分鐘,；
2）無水乙醇中浸泡5分鐘,；
3）95%乙醇中浸泡5分鐘；
4）70%乙醇中浸泡5分鐘,；

2,、抗原修復(fù)
用于福爾馬林固定的石蠟包埋組織芯片。
1）抗原熱修復(fù)
（1）高壓熱修復(fù) 在沸水中加入EDTA（pH8.0）或0.01M枸櫞酸鈉緩沖溶液（pH6.0）,。蓋上不銹鋼高壓鍋的蓋子,，但不進(jìn)行鎖定。將玻片置于金屬染色架上,，緩慢加壓,，使玻片在緩沖液中浸泡5分鐘,，然后將蓋子鎖定，小閥門將會升起來,。10分鐘后,，去除熱源，置入涼水中,，當(dāng)小閥門沉下去后打開蓋子,。本方法適用于較難檢測或核抗原的抗原修復(fù)。
（2）煮沸熱修復(fù) 電爐或者水浴鍋加熱0.01M枸櫞酸鈉緩沖溶液（pH6.0）至95℃左右,，放入組織芯片加熱10~15分鐘,。
（3）微波熱修復(fù) 在微波爐里加熱0.01M枸櫞酸鈉緩沖溶液（pH6.0）至沸騰后將組織芯片放入，斷電,，間隔5~10分鐘,，反復(fù)1-2次。適用的抗原有：AR,，Bax,，Bcl-2，C-fos,，X-jun,，C-kit，C-myc,，E-cadherin,，Chromogranin A，Cyclin,，ER,，Heat shock protein，HPV,，Ki-67,，MDMZ，p53,，p34,，p16，p15,，P-glycoprotein,，PKC，PR,，PCNA,，ras，Rb,，TopoismeraseⅡ等,。
2）酶消化方法 常用0.1%胰蛋白酶和0.4%胃蛋白酶液,。胰蛋白酶使用前預(yù)熱至37℃，切片也預(yù)熱至37℃,，消化時間約為5~30分鐘,；胃蛋白酶消化37℃時間為30分鐘。適用于被固定遮避的抗原,，其中有：Collagen,，Complement，Cytokeratin,，C-erB-2,，GFAP，LCA,，LN等,。

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