Q:western blot 中脫脂奶粉封閉的是哪些蛋白?原理是什么?
A:脫脂奶粉中主要是乳清蛋白和酪蛋白,。原理就是用非抗原的蛋白去封閉膜,,避免標記抗體固定在膜上引起背景增高。
Q:請問封閉液和抗體稀釋液用BSA和脫脂奶粉有什么區(qū)別呢?
有人跟我說奶粉的封閉效果更好些,,但是通常只能用于WesterBlot,,如果要做elisa或者phage display時候,蛋白鋪板的話,,不能使用脫脂奶粉。可是也有人說可以,,請問是否有這個說法呢?
A:所謂封閉是用以減少或消除載體上的非特異性結合蛋白的分子,,一般是脫脂奶粉或BSA.對WesterBlot來說兩者均為常用封閉劑。脫脂奶粉的成份遠較BSA復雜,,如果要做ELISA或者phage display時候,,我們還是用BSA,有關的操作手冊上也是如此。 我推測也沒有依據說脫脂奶粉就不能用,,注意的是各種品牌的脫脂奶粉中殘留的脂質量不同,, 脂質是會影響實驗結果的,即使是用于WesterBlot也要有所挑選,, 有興趣可以試試,,但是不要在正式實驗時試。
Q:請問大家,,封閉的時候,,為什么一定要用脫脂奶粉?
A:膜上有蛋白缺損點,不用蛋白封蛋白缺損點容易出現非特異染色,。
也可用BSA封,,效果并不比脫脂奶粉好。
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