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檢測高密度脂蛋白對于血清和組織樣本的處理方法匯總?!
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樣本處理:
血清(漿):直接測定,,如超過線性范圍用生理鹽水稀釋后測定。 ②,、培養(yǎng)液樣本:吸取培養(yǎng)液,,1000 轉(zhuǎn)/分,離心 10 分鐘,,取上清測定,。
[注]:一般建議細(xì)胞密度在 100萬個/ml以上。 ③,、組織樣本:準(zhǔn)確稱取組織重量,按重量(g):體積(ml)=1:9 的比例,,加入 9 倍體積的勻漿介 質(zhì),冰水浴條件下機械勻漿,,2500 轉(zhuǎn)/分,,離心 10 分鐘,取上清液待測。
[注]:1,、如組織樣本為非高脂樣本,,勻漿介質(zhì)統(tǒng)一用磷酸鹽緩沖液(0.1mol/L pH 7.4)或生理鹽水進(jìn)行提取。
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2,、如組織樣本為高脂樣本或部分為高脂樣本,勻漿介質(zhì)可統(tǒng)一用無水乙醇進(jìn)行提取,。
細(xì)胞樣本: A,、細(xì)胞收集:將制備好的細(xì)胞懸液取出,1000 轉(zhuǎn)/分,,離心 10 分鐘,,棄上清液,留細(xì)胞沉 淀,;用等滲緩沖液(推薦0.1mol/L ,、pH7~7.4 磷酸鹽緩沖液)清洗1~2 次,同樣1000 轉(zhuǎn)/分,,離心10 分鐘,,棄上清液,留細(xì)胞沉淀,;
B,、細(xì)胞破碎:加入 0.2~0.3ml 的勻漿介質(zhì)(推薦 0.1mol/L、pH7~7.4磷酸鹽緩沖液或生理 鹽水)進(jìn)行勻漿,,冰水浴條件下超聲破碎(功率:300W,,3~5 秒/次,間隔 30 秒,,重復(fù) 3~5 次)或手動勻漿,,制備好的勻漿液不離心直接測定。也可采用裂解液裂解(推薦 TritonX-100,,1~2%,,裂解 30~40分鐘),裂解好的液體不離心直接測定,。
[注]:一般建議細(xì)胞密度在 100萬個/ml以上,。破碎好的液體可顯微鏡觀察細(xì)胞是否破碎*
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