日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

Total Superoxide Dismutase Activity Colorimetric Assay Kit II

總SOD活力檢測試劑盒II（比色法）

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

超氧化物岐化酶(Superoxide Dismutase, SOD)能催化超氧化物陰離子發(fā)生岐化作用，生成過氧化氫(H₂O₂)和氧氣(O₂),，是生物體內(nèi)一種重要的抗氧化酶,。

目前有多種SOD活性測定方法，其中NBT（氮藍(lán)四唑）法和細(xì)胞|色素|C法都是常用的檢測方法,。但WST-8法更為先進(jìn),，穩(wěn)定性更好、靈敏度更高,。其基本檢測原理是：

黃|嘌呤氧化酶(Xanthine Oxidase)催化產(chǎn)生超氧化物陰離子,，該超氧化物陰離子可以與WST-8反應(yīng)產(chǎn)生水溶性的甲臜(formazan)產(chǎn)物，而SOD可以抑制上述反應(yīng),。通過分析甲臜產(chǎn)物OD值,，可計算SOD的酶活力。

檢測原理圖如下：

本試劑盒可以檢測細(xì)胞或組織勻漿液上清,、全血,、紅細(xì)胞抽提物、血清等多種生物樣品中的SOD活性,。按照試劑盒提供使用步驟操作,，1個試劑盒可供100次檢測。適合用于高通量篩選研究,。

產(chǎn)品優(yōu)勢

1）WST-8反應(yīng)產(chǎn)物是穩(wěn)定的水溶性產(chǎn)物,；

2）WST-8法可以通過檢測單個時間點的吸光值測定SOD活力,；

3）WST-8法測定時///大抑制百分率可以接近100%；

4）不受樣品中過氧化氫的干擾,，本試劑盒通過添加適量過氧化氫酶等特殊方法,，有效去除常規(guī)樣品中過氧化氫的干擾。

產(chǎn)品組分

運輸和保存方法

冰袋運輸,。 -20℃保存,，有效期6個月。【注】：WST-8溶液需避光保存,。

注意事項

1）待測樣品可-70℃保存一個月，避免反復(fù)凍融導(dǎo)致SOD部分失活,；

2）細(xì)胞或組織等樣品制備時不能采用含有Triton X-100等去垢劑的溶液,，會干擾檢測；

3）抗氧化物會對本試劑盒的檢測產(chǎn)生干擾,，例如0.1mM ascorbic acid,，5mM GSH都會使測定出來的吸光度顯著升高。如果設(shè)置了使用說明中的空白對照3,，就可以消除樣品中的抗氧化物的干擾,。

4）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作,。

使用方法

1．樣品的制備

① 細(xì)胞樣品

1000-2000g,，4℃離心10min收集細(xì)胞，預(yù)冷PBS或生理鹽水洗滌1-2次,。預(yù)冷PBS重懸細(xì)胞并于冰浴進(jìn)行勻漿（可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器）,。隨后勻漿液1500g，4℃離心5min,，取上清待測,。

② 組織樣品

動物解剖前用生理鹽水（0.9% NaCl，含有0.16mg/mL肝|素|鈉）灌流*清除紅細(xì)胞及血坨,，取適量的組織樣品,，加入預(yù)冷的PBS于冰浴進(jìn)行勻漿（可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器）。隨后勻漿液1500g,，4℃離心5min,，取上清待測。

③ 血漿或紅細(xì)胞樣品

用抗凝管收集血液,，顛倒混勻,。4℃，600 g離心10min,，移取上清至新的1mL離心管中,，適量生理鹽水稀釋后即可作為血漿樣本進(jìn)行檢測,。紅細(xì)胞樣品可以參考步驟① 細(xì)胞樣品的制備方法，或其他不含Triton X-100等去垢劑的樣品制備方法,。

【注】：a. 上述樣品準(zhǔn)備完畢后可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒（Yeasen 20201）測定蛋白濃度,。通常10-20µg蛋白的細(xì)胞        或組織勻漿液樣品中的SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作參考),。每種樣品準(zhǔn)備20-100µg蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測,。

b. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計的蛋白使用量，用本試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當(dāng)稀釋樣品,。例如,，小鼠肝臟組織10%勻漿液(組織和勻漿液的重量比為10%)上清，通常需要稀釋10-100倍,。

c. 準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測定,，可以冰浴保存；如果當(dāng)天不能完成測定,，于-80℃凍存可保存至少1個月,。但建議盡量當(dāng)天完成測定。注意反復(fù)凍融會導(dǎo)致SOD部分失活,。

2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作

① WST-8/酶工作液的配制

按照每個反應(yīng)160μL的體積配置適量的WST-8/酶工作液,。均勻混合151μL SOD檢測緩沖液、8μL WST-8和1μL酶溶液,，即可配置成160μL WST-8/酶工作液,。根據(jù)待檢測樣品（包括標(biāo)準(zhǔn)品）的數(shù)量，配置適量的WST-8/酶工作液,。配制好的WST-8/酶工作液4℃或冰浴保存,，可以在當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用,。

【注】：由于酶溶液的用量較少且易沉降,，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當(dāng)混勻后再使用,。

② 反應(yīng)啟動工作液的配制

把試劑盒中的反應(yīng)啟動液(40×) 融解后混勻,，按照每1μL反應(yīng)啟動液(40×)加入39μL SOD檢測緩沖液的比例進(jìn)行稀釋，混勻后即為反應(yīng)啟動工作液,。根據(jù)待檢測樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品)的數(shù)量,，配置適量的反應(yīng)啟動工作液。配制好的反應(yīng)啟動工作液4℃或冰浴保存,， 可以在當(dāng)天使用,，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

③ （可選）SOD標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備

需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品,，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至以下系列濃度：200U/mL,，100U/mL,，50U/mL，20U/mL,，10U/mL,，5U/mL，2U/mL,。在隨后的檢測中可以各取20µL,，參考樣品進(jìn)行檢測。

【注】：為避免稀釋后SOD酶活性的下降,， SOD標(biāo)準(zhǔn)品需現(xiàn)配現(xiàn)用,；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品，但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考,。

3. 樣品測定

① 參考下表使用96孔板設(shè)置樣品孔和各種空白對照孔,。并按下表依次加入待測樣品和其它各種溶液。加入反應(yīng)啟動工作液后充分混勻,。

【注】：加入反應(yīng)啟動工作液后反應(yīng)即會開始，可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應(yīng)啟動工作液的時間先后差異而導(dǎo)致的誤差,。

【*】：如果樣品有顏色或含有抗氧化物質(zhì),，則需設(shè)置空白對照3；如果樣品沒有顏色并且也不含有抗氧化物則沒有必要設(shè)置空白對照3,。

② 37℃孵育30min,。【注】：孵育25-35min檢測出來的SOD活力無顯著差異，但為保證檢測結(jié)果的*性,，推薦孵育30min,。③ 在450nm測定吸光度，如無450nm濾光片,，可以使用420-480nm的濾光片,。可以使用大于650nm的波長作為參考波長進(jìn)行雙波長測定。

4. 樣品中總SOD活力的計算

① 抑制百分率的計算

     參考如下計算公式計算抑制百分率：

     抑制百分率＝[(A_{空白對照1}－A_{空白對照2})－(A_樣品－A_{空白對照3})]/(A_{空白對照1}－A_{空白對照2})×100%

     如果沒有設(shè)置空白對照3,，則可以把計算公式簡化為：

     抑制百分率＝(A_{空白對照1}－A_樣品)/(A_{空白對照1}－A_{空白對照2})×100%

    【注】：盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內(nèi),。如果計算出來的抑制百分率小于30%或大于70%，則通常需要把該樣品重新測定,。如果測定出來的抑制百分率偏高,，則需適當(dāng)稀釋樣品；如果測定出來的抑制百分率偏低,，則需重新準(zhǔn)備濃度較高的待測樣品,。

 ② SOD酶活力單位的定義：在上述黃|嘌呤氧化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為50%時，反應(yīng)體系中的SOD酶活力定義為一個酶活力單位(unit),。

【注】：SOD活力單位的定義方式有很多種,，不同的活力單位需根據(jù)其定義的不同進(jìn)行適當(dāng)換算,。

 ③ SOD酶活力的計算

SOD酶活力的計算公式如下：

待測樣品中SOD酶活力單位＝檢測體系中SOD酶活力單位＝抑制百分率/(1－抑制百分率) units

例如，當(dāng)抑制百分率為50%時,，待測樣品中SOD酶活力單位＝50% / (1－50%)units＝1 unit,；當(dāng)抑制百分率為60%時，待測樣品中SOD酶活力單位＝60% / (1－60%)units＝1.5 units,。

④ 如果樣品為細(xì)胞或組織的勻漿液,，可以根據(jù)樣品的蛋白濃度和稀釋倍數(shù)，將SOD活力單位換算為U/g或U/mg蛋白,。如果樣品為紅細(xì)胞抽提液,，可以根據(jù)血紅蛋白含量，可換算為U/g血紅蛋白或U/mg血紅蛋白,。

其他SOD檢測參考方案

1：SOD酶活力計算的參考方案：可以先使用本試劑盒繪制SOD標(biāo)準(zhǔn)品的抑制百分率曲線,，然后根據(jù)樣品檢測到的抑制百分率對比標(biāo)準(zhǔn)品的抑制百分率曲線計算出樣品中的SOD酶活力單位。本方案僅供參考,，使用本試劑盒時不必使用本方案進(jìn)行檢測和計算,。

此外，本方案需確保標(biāo)準(zhǔn)品的酶活力數(shù)據(jù)可靠,，不會因為標(biāo)準(zhǔn)品的保存問題而導(dǎo)致實際酶活力下降,。

2：SOD酶活力的動力學(xué)檢測：如果條件許可，使用本試劑盒時也可以使用動力學(xué)方法檢測SOD的酶活力,。通常在【步驟3 ① 后可以37℃孵育同時在560nm連續(xù)測定吸光度30min,。根據(jù)30min內(nèi)的吸光度變化的斜率計算出抑制百分率：

抑制百分率＝[(斜率_{空白對照1}－斜率_{空白對照2})－(斜率_樣品－斜率_{空白對照3})]/(斜率_{空白對照1}－斜率_{空白對照2})×100%

其余的計算方法同上述非動力學(xué)的計算方法。動力學(xué)方法的檢測和計算更加精///確一些,，但檢測起來相對要麻煩一些,。

使用本試劑盒通常使用非動力學(xué)方法即可。