初級(jí)會(huì)員·13年聯(lián)系電話
作為DNA分選磁珠的生產(chǎn)廠商，我們zui經(jīng)常被客戶問到的問題就是：高通量測(cè)序（NGS）文庫制備時(shí),，DNA磁珠為什么可以用來純化和分選文庫,？在這里我們整理相關(guān)的資料，對(duì)這個(gè)問題做簡(jiǎn)單的闡述,。分選磁珠的作用原理是基于一種固相載體可逆化固定（SPRI）的分離純化方法,。磁珠體系中一般包含：磁珠、DNA,、聚乙二醇（PEG）,、以及鹽離子等，在一定濃度的PEG和鹽離子環(huán)境中,，DNA可吸附到羧基修飾的高分子磁珠表面（即固相載體）,，該過程是可逆的，在適當(dāng)條件下,，結(jié)合的DNA分子可以被洗脫回收。納米級(jí)別的磁珠表面性
一,、WesternBlot實(shí)驗(yàn)原理蛋白免疫印跡（WesternBlot,，WB）是將蛋白質(zhì)經(jīng)電泳分離后轉(zhuǎn)移到膜上，然后利用抗體進(jìn)行檢測(cè)的技術(shù),。完整的WB流程,，如下圖所示，包含樣本制備,、SDS-PAGE,、轉(zhuǎn)膜,、抗體結(jié)合、蛋白檢測(cè)等5個(gè)大步驟,。二,、試劑準(zhǔn)備詳見文末附錄。三,、實(shí)驗(yàn)步驟1.樣本制備1）融解RIPA裂解液,，混勻。取適當(dāng)量的裂解液,，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF,，使PMSF的zui終濃度為1mM。2）貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液,，用PBS,、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照6孔板每孔加入150-250μ
1.什么是RIPA裂解液,？RIPA裂解液（RadioImmunoprecipitationAssayLysisbuffer，放射免疫沉淀法裂解緩沖液）是一種傳統(tǒng)的可用于裂解細(xì)胞或組織的快速裂解液,，其原理為利用表面活性劑等裂解細(xì)胞膜（包括核膜）,，從組織或細(xì)胞中抽取可溶性蛋白。RIPA裂解液裂解后得到的蛋白一般可直接用于常規(guī)的WB,、IP,、co-IP等實(shí)驗(yàn),。2.RIPA裂解液里有什么？RIPA裂解液的配制方法有很多種,，主要包括裂解成分、蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑三種組分,。裂解成分可通過破壞細(xì)胞膜和蛋白
BenzonaseNuclease高活力核酸酶——消滅核酸,，拒絕污染1.前言核酸污染是生物樣本制備中常常遇到的問題,。在蛋白純化的過程中，如果您提取的蛋白粘度很高,、蛋白純化的得率很低,、蛋白檢測(cè)的結(jié)果很差,，那么您的樣本可能遭受了核酸污染,。如何去除核酸,？超聲法和DNase/RNase酶法是常用的方法，但存在諸多缺陷（表1）,。表1核酸去除,，超聲法與DNase/RNase酶法優(yōu)缺點(diǎn)超聲法DNase/RNase酶法優(yōu)點(diǎn)利用剪切力可在一定程度上降解核酸利用核酸內(nèi)切酶活性,，可在溫和條件下,，較好的消化核酸缺點(diǎn)僅能
YeaRed無毒核酸染料,，您的安全科研助手還有實(shí)驗(yàn)室用EB嗎,？拒絕EB！用無毒核酸染料YeaRed,！溴化乙錠（Ethidiumbromide,，EB）是應(yīng)用早的的核酸染料，并且由于其價(jià)格便宜,、靈敏度高,，早期被實(shí)驗(yàn)者廣泛應(yīng)用。但其分子量小,，很輕易就能穿透細(xì)胞膜,，屬于誘變劑,，具有高致癌性,，對(duì)人體潛在危害非常大,。實(shí)驗(yàn)者使用時(shí)需要謹(jǐn)慎再謹(jǐn)慎,，另外，單獨(dú)的EB區(qū)占用了實(shí)驗(yàn)室的大塊空間,，廢膠,、廢液的處理費(fèi)時(shí),、費(fèi)力又費(fèi)錢，以及不小心碰到EB區(qū)的東西可能再也不能重見天日了,，真是讓人又愛又恨。隨著技術(shù)的發(fā)展,，人們對(duì)
PeptideHydrogelSuitablefor3DCellCulture——3D多肽水凝膠超越基質(zhì)膠（matrigel）Yeasen多肽水凝膠產(chǎn)品是由一種由16個(gè)氨基酸組成的多肽,，在鹽離子存在情況下自發(fā)組裝成的水凝膠支架結(jié)構(gòu)。多肽的大小通常在5nm左右,，是親水性和疏水性氨基酸殘基交替排列組成的兩性分子肽段,，能形成折疊片結(jié)構(gòu)，并自組裝形成納米纖維,，這些納米纖維相互交織在一起形成基質(zhì)并進(jìn)一步形成含水量超過99.5%的水凝膠支架（見圖1）。Yeasen多肽水凝膠無需通過調(diào)節(jié)聚合物和交聯(lián)劑的量來獲
關(guān)鍵詞：ChromoTek,、GFP、RFP,、免疫沉淀,、IP,、抗體,、瓊脂糖,、磁珠德國ChromoTek公司成立于2008年，擁有德國制造的良好質(zhì)量,，致力于細(xì)胞生物學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)的研發(fā)與研究,，公司擁有強(qiáng)大的研發(fā)團(tuán)隊(duì),，有*生物制劑，主要使命是花費(fèi)較少的時(shí)間和成本，使客戶獲得得高質(zhì)量的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),。產(chǎn)品包括單克隆抗體、重組單域抗體,、熒光抗體,、GFP或RFP連接蛋白等。德國ChromoTek是一家專業(yè)研發(fā)生產(chǎn)標(biāo)簽抗體的公司,，利用羊駝抗體的特異性解決了傳統(tǒng)GFP/RFP抗體分子量過大、轉(zhuǎn)染表達(dá)效率低的問題,，研發(fā)
