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動(dòng)植物組織RNA穩(wěn)定液是一種用于穩(wěn)定并保護(hù)采集樣本內(nèi)RNA的無毒溶液,,可迅速滲入組織,,滅活內(nèi)源RNase,從而避免RNA降解,,保持樣本中RNA的完整性,。
動(dòng)植物組織RNA穩(wěn)定液可以保存哪些樣本?
該產(chǎn)品適用于多種脊椎動(dòng)物樣本,,包括腦,、心、腎,、脾,、肝、睪丸,、骨骼肌,、脂肪、肺和胸腺,,對大腸桿菌,、果蠅、組織培養(yǎng)細(xì)胞,、全血細(xì)胞和一些植物也有效,。
動(dòng)植物組織RNA穩(wěn)定液在不同溫度下的保存時(shí)間?
保存條件:
37°C 下可穩(wěn)定1天
25°C 下可穩(wěn)定1周
4°C 下可穩(wěn)定1個(gè)月
-20°C或-80℃ 長期保存
動(dòng)植物組織RNA穩(wěn)定液的使用方法
A. 動(dòng)物組織:RNAsafe穩(wěn)定液不會(huì)破壞動(dòng)物組織結(jié)構(gòu)的完整性,。
處理過程:將組織切成合適大小后(≤0.5 cm),,然后加入5倍體積RNAsafe。
注:已浸入RNAsafe的組織經(jīng)平衡一段時(shí)間后,,可從溶液中取出,,切成更小的組織塊(≤0.5 cm大小),,再重新放回RNAsafe,。
某些組織(如骨頭)具有比較弱的液體滲透性,不適合用本品進(jìn)行RNA保護(hù),。
B. 植物組織:本品對于柔軟的植物組織(如嫩葉,,嫩莖)可直接滲透,,且達(dá)到理想的RNA保護(hù)效果。
處理過程:將組織切成合適的大?。ā?.5 cm)后,,加入5倍體積的RNAsafe穩(wěn)定液。
注:某些植物組織天生具有的屏障(如葉子表面的蠟層)可阻礙RNAsafe滲透,,對于此類組織,,往往需要破壞這些屏障層以允許溶液的浸透。
C. 組培細(xì)胞,、白細(xì)胞等:按照標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)操作收集細(xì)胞沉淀(用PBS清洗1-2次),。之后加入5~10倍體積的RNAsafe。
D. 酵母:離心棄上清,,收集約108個(gè)細(xì)胞(12,000g,,2 min)。加入0.5~1 mLRNAsafe,。
長期保存:應(yīng)置于RNAsafe中,,4℃放置1小時(shí)。然后離心棄上清,,收集酵母細(xì)胞(12,000g,,5 min),-80℃保存,。
使用動(dòng)植物組織RNA穩(wěn)定液的注意事項(xiàng)
A. -80℃保存:樣品結(jié)凍保存,。對于歸檔的樣本,建議-80℃保存,。該保存條件下,,樣本可長期保存,保護(hù)效果佳,。
操作過程:樣本4℃浸透過夜,,然后再轉(zhuǎn)移至-80℃。
如果中間需要做樣本的融化,,建議取出4℃浸透過夜的組織或離心收集細(xì)胞,,然后再凍存于-80℃。RNAsafe保護(hù)后的樣本抽提RNA時(shí),,可直接放在室溫融化,,之后重新凍上,不會(huì)造成RNA量的嚴(yán)重?fù)p失或者RNA完整性的明顯破壞,。
B. -20℃保存:同樣適用于歸檔樣本的保存。樣本不會(huì)在-20℃結(jié)凍,,但可能會(huì)形成結(jié)晶,。該保存條件下,,樣本可長期保存,不會(huì)對后續(xù)RNA分離造成影響,。
操作過程:樣本4℃浸透過夜,,然后再轉(zhuǎn)移至-20℃。RNAsafe保護(hù)后的樣本抽提RNA時(shí),,可直接放在室溫融化,,之后重新凍上,不會(huì)造成RNA量的嚴(yán)重?fù)p失或者RNA完整性的明顯破壞,。
C. 4℃保存:大部分樣品放到RNAsafe中,,可穩(wěn)定保護(hù)1個(gè)月,不會(huì)有明顯的RNA降解發(fā)生,。
D. 25℃(室溫)保存:建議低溫環(huán)境保存,。若條件不允許,請將RNAsafe穩(wěn)定液于冰上冷卻幾個(gè)小時(shí),,然后將樣品浸入此溶液中,,室溫穩(wěn)定保存1周,不會(huì)有明顯的RNA降解發(fā)生,。
E. 37℃保存:純化的RNA樣本于37℃孵育24 h,,結(jié)構(gòu)依然完整。
使用動(dòng)植物組織RNA穩(wěn)定液保存的樣本如何做RNA提???
因RNAsafe滅活RNase的過程是可逆的,受保護(hù)的樣本使用前務(wù)必不要清洗掉RNAsafe,。
A. 組織樣本:用滅菌鑷子從RNAsafe中取出組織塊,,然后用干凈的吸水紙吸掉表面液體。之后立即置于裂解液中勻漿,。
B:細(xì)胞樣本:由于RNAsafe密度較大,,此時(shí)需要使用大于普通介質(zhì)的離心力。一般來說,,保存在RNAsafe中的細(xì)胞能承受更高的轉(zhuǎn)速,,并維持細(xì)胞的完整性。大部分細(xì)胞可通過5,000g,,5 min離心收集沉淀,。
注意:由于不同細(xì)胞承受離心力會(huì)有差異,建議先用少量的細(xì)胞進(jìn)行離心速度承受性的測試,。
C. 抽提RNA:按照RNA抽提Protocol進(jìn)行即可,。
測試數(shù)據(jù)展示
實(shí)驗(yàn)結(jié)論:37℃ 1天、25℃ 7天、4℃ 30天,、-80℃ 30天保存的細(xì)胞采用翌圣組織細(xì)胞RNA提取試劑盒(Cat#19221)提取RNA,,RNA濃度高,純度好,,條帶完整清晰,,28S:18S>2:1,完整性非常好,,且沒有DNA殘留,。
產(chǎn)品推薦
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號(hào) |
RNAsafe Tissue Stabilizer RNAsafe動(dòng)植物組織RNA穩(wěn)定液 | 10604ES |
RNAsafe-ICE冰凍動(dòng)植物組織RNA穩(wěn)定-過渡溶液 | 10605ES |
MolPure® Cell/Tissue Total RNA Kit 細(xì)胞/組織總RNA提取試劑盒 | 19221ES |
TRIeasy™ Total RNA Extraction Reagent TRIeasy™總RNA提取試劑 | 10606ES |