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翊圣生物提供高成功率糖尿病建模用STZ：純度≥98%（HPLC測定）,。

文章包含以下知識點

1. STZ誘導(dǎo)糖尿病模型的構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)SOP

2. STZ誘導(dǎo)糖尿病模型建模效果評估指標(biāo)

3. STZ誘導(dǎo)糖尿病模型的失敗原因解析

4. STZ誘導(dǎo)小/大鼠死亡率高的原因解析

5. 糖尿病建模的影響因素

6. STZ建模方法思路梳理

7. 高建模成功率STZ使用指南

絕大多數(shù)由化學(xué)藥物誘導(dǎo)的動物疾病模型具備標(biāo)準(zhǔn)化思路,，是用一定劑量的某種化學(xué)藥物借助某種手段抵達正常組織/器官,，并在處理一段時間后評估疾病指標(biāo)。下面就從幾個方面梳理建立鏈脲佐菌素（Streptozocin，STZ）誘導(dǎo)的糖尿病疾病模型的思路,。

1.STZ誘導(dǎo)糖尿病模型的構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)SOP

1.1 動物的準(zhǔn)備

盡量選用雄性動物，雌性含有激素影響建模效率,。有研究顯示,，雌性動物成模率差，而且可能會比雄性出現(xiàn)更高死亡率,，尤其是I型,。

I型糖尿病（Type I diabetes）一般按照體重選擇即可,，推薦大鼠170-200g,，小鼠17-22g,，適應(yīng)性喂養(yǎng)1~2周后空腹注射STZ,，成模率相對理想。

II型糖尿?。═ype II diabetes）對于大鼠（比如SD/Wistar）,，選取4-5周齡，體重在90-100g,，高脂（高糖）飼料喂養(yǎng)4-6周體重約達240-280g,。 對于小鼠（比如C57/ICR/昆明小鼠），選取4-5周齡,，體重在16-20g,，高脂（高糖）飼料喂養(yǎng)4-6周體重約達30-35g。 對于新購入動物或更換飼養(yǎng)環(huán)境需要先用普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)一周,，然后再選擇適合周齡/體重動物轉(zhuǎn)用高脂高糖飼料繼續(xù)喂養(yǎng),。從模型建立成功率來看，大鼠推薦用SD,，小鼠推薦C57,。

1.2 造模前的喂養(yǎng)

造膜前的喂養(yǎng)，Ⅰ型糖尿病模型成模比較快,，通常大鼠在普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)2周后即可開始造模,；Ⅱ型糖尿病模型：高脂飲食誘導(dǎo)加小劑量STZ。造模前喂以高脂(高糖)飼料,，誘發(fā)出胰島素抵抗,。

1.3 試劑的準(zhǔn)備

①高脂(高糖)飼料

高脂(高糖)飼料成分：其中含10%蔗糖，10%豬油,，5%膽固醇

由基礎(chǔ)鼠飼料加蔗糖,、煉豬油和蛋黃按質(zhì)量比搭配制作高脂高糖飼料：其比例為豬油18 % ,蔗糖20 % ,蛋黃3 % ,基礎(chǔ)飼料59 %。

②STZ溶劑——檸檬酸鈉緩沖液的配制

A液和B液的配制：稱取檸檬酸(FW:210.14) 2.1g加入雙蒸水100mL中配成A液,；稱取檸檬酸鈉(FW:294.10) 2.94g加入雙蒸水100mL中配成B液,。

檸檬酸鈉緩沖液的配制：將A,、B液按一定比例混合（1：1.32也有按1:1的），pH計測定pH值,，調(diào)節(jié)pH值到4.2-4.5,，即是所需檸檬酸鈉緩沖液。

1.4 注射前準(zhǔn)備

配制STZ注射液前,，STZ凍干粉放置于干燥滅菌瓶內(nèi),，外用鋁箔紙或錫紙包好，與檸檬酸鈉緩沖液一起置于冰浴預(yù)冷,，帶到動物房備用,。

注意：STZ凍干粉從−20°C冰箱取出后，于室溫干燥避光放置10min左右,，使其*解凍（很重要）,。

1.5 配制注射液

大鼠過夜禁食（不禁水）后稱重并測血糖濃度。對大鼠進行分組,，以便按照動物數(shù)目和注射劑量來準(zhǔn)備STZ注射液,。以1%濃度（w/V）溶解STZ，過濾消毒,，切記STZ*溶解,。

注意：①STZ不穩(wěn)定，易失活,，快速稱取后剩余試劑仍要求干燥避光,，推薦用干燥鋁箔(或錫箔)紙包裹。②注射時若操作不熟練,，切忌不可一次性溶解完STZ,。建議根據(jù)操作熟練度，分組溶解STZ,，比如10只或15只鼠/組,。③亦可提前將STZ按動物分組的所需量稱重，分裝,。

1.6 注射

按動物空腹體重腹腔或尾靜脈注射,。如果注射操作技術(shù)不熟練，應(yīng)兩組交替注射,，注射應(yīng)在30分鐘內(nèi)完畢,。注意：注射大多要求快速注射。

注意：①Ⅰ型糖尿病模型：大鼠劑量為70～65mg/kg

Ⅱ型糖尿病模型：高糖高脂喂養(yǎng)1～2 個月的大鼠,STZ 劑量在25～40mg/kg,。

1.7 注射后

注射完STZ后要給予動物足夠的水,、食物（糖尿病鼠的基本生活特征），需每日換墊料，保持鼠籠干燥,。飼養(yǎng)時,，注意避免強日光照射。盡可能勤消毒,。

注意：STZ造模后,，明顯血糖水平波動呈現(xiàn)3個時相，一時性高血糖（1-2h）,、短暫低血糖（6-10h）,、持續(xù)高血糖（>72h）。必須適當(dāng)補給胰島素和葡萄糖,。

2. STZ誘導(dǎo)糖尿病模型建模效果評估指標(biāo)

與對照組對比,，統(tǒng)計以下指標(biāo)：

2.1 一般性指標(biāo)：出現(xiàn)多飲、多食,、多尿現(xiàn)象,，體重下降；

2.2 其他指標(biāo)：空腹血糖,、空腹血清胰島素水平,、血清胰島素水平,、胰島素敏感性,、糖耐量等；

2.3 血清生化指標(biāo)：T-Cho,、TG,、HDL-C、LDL-C,、CR,、BUN、Alt等,。

2.4 病理切片：胰腺組織病理切片

3.STZ誘導(dǎo)糖尿病模型的失敗原因解析

3.1 STZ的品質(zhì)是關(guān)鍵,，建模用STZ純度應(yīng)不低于98%（HPLC檢測）。

3.2 STZ失效：應(yīng)干燥保存,，避免受潮,。粉末避免長時間室溫放置，溶解的STZ是非常不穩(wěn)定的,，在中性pH值的半衰期為15分鐘,。注意用酸性pH值溶解STZ，*放在冰浴里,。（了解更多STZ的使用,，可查看：h/t/t/ps://w/w/w.yeasen.c/o/m/products/detail/1002 ）

3.3 腹腔注射是否注射到腸子等臟器。

模型不*，建議,，再觀察3天,，還是不成模型的話，重新注射一次,。

4.STZ誘導(dǎo)小/大鼠死亡率高的原因解析

4.1 鼠的體重過低,；

4.2 一定要保證足夠的飲水量(飲水量不足容易導(dǎo)致死鼠);

4.3 高血糖和低血糖都會造成死鼠，避免死鼠可以通過注射胰島素或暫時補糖,，兩種途徑： ①常見為血糖過高,。補胰島素法，補一些中效胰島素,。例如給諾和靈n或NPH(中性魚精蛋白鋅胰島素),每次2-3個單位,，過了3-5天，大鼠一般死亡率就低了,；②補糖法,，禁食后的鼠，注射的時候已經(jīng)處于低血糖狀態(tài),，造模4小時后腹腔注射20%的葡萄糖,，可避免因注射時血糖過低死鼠；

4.4 防止動物自相殘殺,。食物缺乏和供水不足的情況下,，會互相撕殺、啃食同類,，所以食物和飲水要供應(yīng)充足,，*是兩路供應(yīng);

4.5 防止感染。糖尿病大鼠尿量多,，墊料潮濕,，需要勤換墊料，所以糖尿病大鼠較其他大鼠容易出現(xiàn)感染,，特別是泌尿道感染和腹腔感染,。腹腔注射、皮下注射及采血測血糖等侵入性操作前后,，要注意消毒工作,。如每次采血測血糖后可用四環(huán)素(或金霉素眼藥膏)局部涂抹處理傷口預(yù)防感染。

5.糖尿病建模的影響因素

糖尿病疾病模型的影響因素包括STZ建模試劑的質(zhì)量,、動物狀況及給藥方式等,。其中，試劑主要性能為純度,、穩(wěn)定性,、溶解特性等,，動物狀況主要包括遺傳背景，雌雄,，性別,，體重，飼養(yǎng)環(huán)境,，飲食結(jié)構(gòu)等,，給藥方式包括給藥時間、給藥間隔和給藥途徑,。差異化的因素帶來差異化的建模效果,。

6.STZ建模方法思路梳理

影響因素標(biāo)準(zhǔn)化是實現(xiàn)建模目的及建模穩(wěn)定性的保證。理論上,，所有的動物建模實驗均要求預(yù)實驗,。

以STZ誘導(dǎo)糖尿病模型而言，實驗時STZ的給藥量應(yīng)參照預(yù)實驗的結(jié)果,，盡量不要盲目按照文獻上或他人的給藥量來直接使用,，鼠均重和空腹(低糖狀態(tài))抗藥力、禁食時長,、注射選時,、以及之前飼養(yǎng)過程、測糖選時等都不相同,，通過預(yù)實驗來確定符合自己實驗鼠的給藥計量,，才是蕞科學(xué)的。

7.高建模成功率STZ使用指南

STZ保存,、溶解,、分裝等使用注意事項,，詳見h/t/t/ps://w/w/w.yeasen.c/o/m/products/detail/1002