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實驗原理
核型(karyotype)一詞在20世紀20年代首先由蘇聯(lián)學(xué)者T. A. Levzky等人提出,。核型分析的發(fā)展有三項技術(shù)起了很重要的促進作用,,一是1952年美籍華人細胞學(xué)家徐道覺發(fā)現(xiàn)的低滲處理技術(shù),,使中期細胞的染色體分散良好,,便于觀察,;二是秋水仙素的應(yīng)用便于富集中期細胞分裂相,;三是植物凝集素(PHA)刺激血淋巴細胞轉(zhuǎn)化,、分裂,,使以血培養(yǎng)方法觀察動物及人的染色體成為可能。
核型是指染色體組在有絲分裂中期的表型,,包括染色體數(shù)目,、大小、形態(tài)特征等,。核型分析是對染色體進行測量計算的基礎(chǔ)上,,進行分組、排隊,、配對并進行形態(tài)分析的過程,。核型分析對于探討人類遺傳病的機制、物種親緣關(guān)系與進化,、遠緣雜種的鑒定等都有重要意義,。將一個染色體組的全部染色體逐個按其特征描繪下來,再按長短,、形態(tài)等特征排列起來的圖像稱為核型模式圖,,它代表一個物種的核型模式。
1960年,,丹佛會議上,,提出了人類有絲分裂染色體命名標(biāo)準體制草案,為以后的所有命名方法奠定了基礎(chǔ),。1963年,,倫敦會議上,正式批準Patan 提出的A,、B,、C、D,、E,、F、G七個字母表示七組染色體的分類法。1966年,,芝加哥會議上,,提出人類染色體組和畸變速記符號的標(biāo)準命名體制。
A組(1-3號)
1號:zui大的中央著絲粒染色體,,長臂靠近著絲粒外有次縊痕,。
2號:zui大的亞中著絲粒染色體。
3號:中央著絲粒染色體,,比1號小三分之一,。
B組(4-5號):為較大的亞中央著絲粒染色體,二者不易區(qū)分,。
C組(6-12號,,X):中等近中央著絲粒染色體,彼此難區(qū)分,。
6、7,、9,、11號:著絲粒略近中央。
8,、10,、12號:偏離中央。
9號:q有次縊痕,。
X位于6,、7之間。
D組(13-15號):中等近端著絲點染色體,,p常有隨體,。
E組(16-18號)
16號:中等中央著絲粒染色體,q上有次縊痕,。
17號:較小,,近中央著絲粒染色體。
18號:較小,,近中央著絲粒染色體,,p比17號更短。
F組(19-20號):小的中央著絲粒染色體,,彼此不易區(qū)分,。
G組(21-22號,Y):小的近端著絲粒染色體,。
21,、22號:p常有隨體,q常呈分枝狀彼此不易區(qū)分。
Y:p無隨體,,q通常平行靠近,。
實驗試劑
Geimsa染色液等。
實驗設(shè)備
攝影顯微鏡,,顯微測微尺,,染色缸,吹風(fēng)機等,。
實驗材料
人外周血淋巴細胞染色體標(biāo)本
實驗步驟
1,、將人外周血淋巴細胞染色體標(biāo)本放入染色缸,用Geimsa染色液染色10-15分鐘→在盛水塑料杯中沖涮→風(fēng)干→鏡檢
觀察細胞的標(biāo)準為:
(1)細胞完整,,輪廓清晰,,染色體分布在同一水平面上。
(2)染色體形態(tài)和分布良好,。
(3)無重疊,,即使有個別重疊,也要能明確辯認,,以免差錯,。
(4)所觀察的細胞處于同一有絲分裂階段,即染色體螺旋化程度或染色體長短大致一樣,。
(5)在所觀察的細胞周圍,,沒有離散的單個或多個染色體存在,以免影響計數(shù),。
2,、顯微攝影:將制好的片子放在數(shù)碼攝影顯微鏡下進行拍攝,以供分析,。
3,、核型分析
核型:一個細胞內(nèi)所有染色體按一定順序排列起來,代表著某一個體所有細胞的染色體組成,,包括數(shù)目,、形態(tài)、大小等,,分為A,、B、C,、D,、E、F,、G等七組和一組性染色體,。
組型:把核型按模式圖的形式表現(xiàn)出來,,代表一個種的染色體組成。
4,、完成染色體組型分析,。
注意事項
顯微照片分析:
染色體計數(shù);染色體測量,;
相對長度=單個染色體長度/ 整套單倍染色體總長×100
臂比率=q/p
著絲點指數(shù)=p/(p q) ×100