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標(biāo)簽： 流式 細(xì)胞儀
流式細(xì)胞儀（flow cytometer）是一種能夠探測和計(jì)數(shù)以單細(xì)胞液體流形式穿過激光束的細(xì)胞檢測裝置，由于在檢測中使用的細(xì)胞標(biāo)志示蹤物質(zhì)為熒光標(biāo)記物,，因此，用來分離、鑒定細(xì)胞的流式細(xì)胞儀有被稱為熒光激活細(xì)胞分類儀,，是分離和鑒定細(xì)胞群及亞群的一種強(qiáng)而有力的應(yīng)用工具,。
實(shí)驗(yàn)方法
- 流式細(xì)胞儀
| 實(shí)驗(yàn)方法原理 | 流式細(xì)胞儀的使用一般分為三個步驟,。*,，是儀器前階段,，包括試劑的準(zhǔn)備，細(xì)胞制備,、細(xì)胞的熒光染色,；第二，是流式細(xì)胞儀階段,，主要是儀器的操作；第三,，是結(jié)果分析階段,。 |
|---|---|
| 實(shí)驗(yàn)材料 | 淋巴細(xì)胞 外周血的白細(xì)胞 |
| 試劑、試劑盒 | FACS緩沖液 PBS 疊氮鈉溶液 儀器緩沖液 FACS清潔液 FACS洗凈液 |
| 儀器,、耗材 | 流式細(xì)胞儀 |
| 實(shí)驗(yàn)步驟 | 一,、細(xì)胞和試劑的準(zhǔn)備
4. FACS緩沖液： 1×PBS 950 ml FCS 40 ml 10%疊氮鈉溶液 10 ml
1. 單細(xì)胞懸液的制備：將1×105~1×107的細(xì)胞放入1.5 m l離心管中3000 r/min 離心5分鐘,，棄上清,；加入FACS緩沖液100 μl 懸浮細(xì)胞。
b.abti-CD3（2 ng/ml）檢測結(jié)果
c.abti-CD3（10 ng/ml）檢測結(jié)果
CD4及CD8細(xì)胞點(diǎn)狀二維圖結(jié)果
不同的熒光物要求選擇不同的激發(fā)波長,，參見下表
（2）細(xì)胞的吸入：將裝有細(xì)胞的FACS測定管放置到機(jī)器吸管孔處。 先預(yù)檢測樣品,，然后進(jìn)行實(shí)際檢測,。可根據(jù)細(xì)胞的濃度選擇測定的速度（低,、中或高）,。所有的數(shù)據(jù)將自動存入微機(jī)。
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| 注意事項(xiàng) | 1. 減少非特異熒光染色 （1）細(xì)胞的活性和狀態(tài)：流式細(xì)胞儀不但可探測細(xì)胞表面的熒光,，也可探測細(xì)胞內(nèi)的熒光。因此,，如果要檢測細(xì)胞表面的分子,，一定要保證細(xì)胞的活性，還應(yīng)盡可能保持細(xì)胞靜止,，通常在4度進(jìn)行操作,。否則，熒光抗體進(jìn)入死細(xì)胞內(nèi),，會產(chǎn)生非特異結(jié)果,。
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