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標簽： 小鼠 腹腔 巨噬 細胞培養(yǎng)
小鼠腹腔巨噬細胞培可以：（1）吞噬與清除異物,；（2）分泌生物活性物質(zhì)；（3）對仿生全降解材料,，降解后的無機產(chǎn)物與生命過程中有機物的合成作用,。
實驗方法
- 細胞培養(yǎng)技術(shù)
| 實驗方法原理 | 取小鼠腹腔巨噬細胞與乳膠顆粒在不同培養(yǎng)條件下混合后定量加入24孔板,，37 ℃，5% CO2 培養(yǎng)箱中孵育后,，熒光顯微鏡下計數(shù)吞噬百分率和吞噬指數(shù),。 |
|---|---|
| 實驗材料 | 小鼠 |
| 試劑、試劑盒 | 1640 培養(yǎng)基 小牛血清 雙抗 臺盼蘭 |
| 儀器,、耗材 | 手術(shù)器械 一次性注射器 眼科鑷 眼科剪 96 孔板 CO2培養(yǎng)箱 |
| 實驗步驟 | 一,、實驗步驟 1. 如果采用刺激物，則可在實驗前三天腹腔注射3%巰基乙醇酸鈉每只2 mL,，獲得的巨噬細胞數(shù)要多一些,。不采用刺激物，直接開始下面的步驟,。
2. 拉頸處死小鼠,，在75%酒精浸泡1-2 分鐘，移入超凈臺中,，仰臥位固定于解剖板上,，碘酒消毒腹部皮膚，酒精綿球脫碘,。用手術(shù)直剪充分剪開腹部皮膚,，暴露腹部肌層，再用酒精綿球消毒腹部肌層。
3. 用注射器抽取5mL 含雙抗的RPMI 1640 培養(yǎng)基注入腹腔,，用綿球輕揉腹部1-2 min,，然后，用眼科鑷稍提起腹腔,，并用眼科剪剪開一個小口,，用吸管吸取細胞懸液，移入離心管中(個人認為,，此法比用注射器抽吸好一些),。
4. 1000 rpm 離心5 min 后，用含雙抗的RPMI 1640 培養(yǎng)基洗滌一次,，再次離心，重懸細胞于含10% 小牛血清的RPMI 1640 培養(yǎng)液中,，如果是作為飼養(yǎng)細胞使用,，則選擇相應的培養(yǎng)液。臺盼藍拒染法計數(shù),，將細胞稀釋到目的濃度后,，接種即可。 5. 如果是作為飼養(yǎng)細胞使用,，調(diào)整濃度至2x105個/mL,，接種到96 孔板中，每孔100-200 µL,；如 果作為其它實驗使用,，可以調(diào)整成2x106/mL，加到 24 孔平底培養(yǎng)板中,，1 mL/孔,；5% CO2溫箱孵育2 h 后， 換液,，并用RPMI 1640 培養(yǎng)基洗1-2 次,，棄去未粘附細胞，貼壁細胞為單層的巨噬細胞,。 二,、結(jié)果
巨噬細胞剛貼壁時偏圓形，或者類似鵝卵石形狀,，然后慢慢伸出偽足,，鋪開呈三角形或多角形。巨噬細胞有吞噬的特性,，當與細菌混合在一起的時候,，在40 倍物鏡下可以看到巨噬細胞吞噬細菌，因此，巨噬細胞作為飼養(yǎng)細胞可以清除部分污染的細菌,、支原體和部分細胞碎片,。 收起 |
| 注意事項 | 注意事項：嚴格無菌操作，在超凈臺內(nèi)進行,；為避免交叉感染,，每一只小鼠更換注射器；吸管吸取細胞懸液的時候,，盡量不要吸到大小腸,，否則容易引起成纖維細胞污染。 展開 |
| 其他 | 一,、討論 |
