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標(biāo)簽： 小鼠 腹腔 巨噬 細(xì)胞培養(yǎng)
小鼠腹腔巨噬細(xì)胞培可以：（1）吞噬與清除異物；（2）分泌生物活性物質(zhì),；（3）對仿生全降解材料,，降解后的無機(jī)產(chǎn)物與生命過程中有機(jī)物的合成作用。
實(shí)驗(yàn)方法
- 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)
| 實(shí)驗(yàn)方法原理 | 取小鼠腹腔巨噬細(xì)胞與乳膠顆粒在不同培養(yǎng)條件下混合后定量加入24孔板,，37 ℃,，5% CO2 培養(yǎng)箱中孵育后，熒光顯微鏡下計(jì)數(shù)吞噬百分率和吞噬指數(shù),。 |
|---|---|
| 實(shí)驗(yàn)材料 | 小鼠 |
| 試劑,、試劑盒 | 1640 培養(yǎng)基 小牛血清 雙抗 臺盼蘭 |
| 儀器、耗材 | 手術(shù)器械 一次性注射器 眼科鑷 眼科剪 96 孔板 CO2培養(yǎng)箱 |
| 實(shí)驗(yàn)步驟 | 一,、實(shí)驗(yàn)步驟 1. 如果采用刺激物,，則可在實(shí)驗(yàn)前三天腹腔注射3%巰基乙醇酸鈉每只2 mL，獲得的巨噬細(xì)胞數(shù)要多一些,。不采用刺激物,，直接開始下面的步驟。
2. 拉頸處死小鼠,，在75%酒精浸泡1-2 分鐘,，移入超凈臺中，仰臥位固定于解剖板上,，碘酒消毒腹部皮膚,，酒精綿球脫碘,。用手術(shù)直剪充分剪開腹部皮膚，暴露腹部肌層,，再用酒精綿球消毒腹部肌層,。
3. 用注射器抽取5mL 含雙抗的RPMI 1640 培養(yǎng)基注入腹腔，用綿球輕揉腹部1-2 min,，然后,，用眼科鑷稍提起腹腔，并用眼科剪剪開一個(gè)小口,，用吸管吸取細(xì)胞懸液,，移入離心管中(個(gè)人認(rèn)為，此法比用注射器抽吸好一些),。
4. 1000 rpm 離心5 min 后,，用含雙抗的RPMI 1640 培養(yǎng)基洗滌一次，再次離心,，重懸細(xì)胞于含10% 小牛血清的RPMI 1640 培養(yǎng)液中,，如果是作為飼養(yǎng)細(xì)胞使用，則選擇相應(yīng)的培養(yǎng)液,。臺盼藍(lán)拒染法計(jì)數(shù),，將細(xì)胞稀釋到目的濃度后，接種即可,。 5. 如果是作為飼養(yǎng)細(xì)胞使用，調(diào)整濃度至2x105個(gè)/mL,，接種到96 孔板中,，每孔100-200 µL；如 果作為其它實(shí)驗(yàn)使用,，可以調(diào)整成2x106/mL,，加到 24 孔平底培養(yǎng)板中，1 mL/孔,；5% CO2溫箱孵育2 h 后,， 換液，并用RPMI 1640 培養(yǎng)基洗1-2 次,，棄去未粘附細(xì)胞,，貼壁細(xì)胞為單層的巨噬細(xì)胞。 二,、結(jié)果
巨噬細(xì)胞剛貼壁時(shí)偏圓形,，或者類似鵝卵石形狀，然后慢慢伸出偽足,，鋪開呈三角形或多角形,。巨噬細(xì)胞有吞噬的特性,，當(dāng)與細(xì)菌混合在一起的時(shí)候，在40 倍物鏡下可以看到巨噬細(xì)胞吞噬細(xì)菌,，因此,，巨噬細(xì)胞作為飼養(yǎng)細(xì)胞可以清除部分污染的細(xì)菌、支原體和部分細(xì)胞碎片,。 收起 |
| 注意事項(xiàng) | 注意事項(xiàng)：嚴(yán)格無菌操作,，在超凈臺內(nèi)進(jìn)行；為避免交叉感染,，每一只小鼠更換注射器,；吸管吸取細(xì)胞懸液的時(shí)候，盡量不要吸到大小腸,，否則容易引起成纖維細(xì)胞污染,。 展開 |
| 其他 | 一、討論 |
