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標(biāo)簽： 四唑鹽 MTT 比色
MTT法建立于20世紀(jì)80年代初，是一種通過測定細(xì)胞能量代謝水平用以間接反映細(xì)胞增殖情況的檢測方法,。它基于兩個假設(shè)：1,、只有活細(xì)胞能夠?qū)TT還原成為難溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶物,，而死細(xì)胞不能達到；2,、其吸光度與活細(xì)胞數(shù)量成直線正相關(guān),。
實驗方法
- MTT法
| 實驗方法原理 | 活細(xì)胞的線粒體中的琥珀脫氫酶能使外源性的MTT還原為難溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶物并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜能溶解細(xì)胞中的紫色結(jié)晶物,，用酶聯(lián)免疫檢測儀在490 nm 波長處測定其光吸收值,，可間接反映細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi),，MTT結(jié)晶物形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比,。 |
|---|---|
| 實驗材料 | 細(xì)胞 |
| 試劑、試劑盒 | D-Hanks液 牛血清 RPMI1640 雙抗 0.08%胰酶 |
| 儀器,、耗材 | 凈化工作臺 離心機 恒溫水浴箱 冰箱 倒置相差顯微鏡 培養(yǎng)箱 吸管 玻璃瓶 培養(yǎng)瓶 廢液缸 吸頭 槍頭 膠塞 離心管 量加樣槍 紅血球計數(shù)板 |
| 實驗步驟 | 一,、接種細(xì)胞
|
| 注意事項 | 1. 選擇適當(dāng)?shù)募?xì)胞接種濃度。在進行MTT試驗前,，對每一種細(xì)胞都應(yīng)測其貼壁率,、倍增時間以及不同接種細(xì)胞數(shù)條件下的生長曲線，然后確定試驗中每孔的接種細(xì)胞數(shù)和培養(yǎng)時間,。
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